这次的CIK表型有点离谱，求大神解惑

baby00000003

先上图，
& f# n3 {& O( [: i9 q1 D' J% I- R: q8 S5 n4 C8 f& r

9 L. m# W5 Z1 V- ]% \3 E这是培养至D4的外周血CIK  d9 x7 `$ a4 R; x
不同以往的是CD3阳性率很低（图中的FITC）但是CD56阳性率相对较高（图中的PE）
2 ^3 v. ~5 R) R# o# u# G8 E7 y0 p/ V2 a
D0刚刚分离PBMC时的表型检测，CD3阳性率已经是50%左右，也就是说随着培养CD3的阳性率反而降低了
3 @1 o" h: s8 [8 }  g4 J# ^; g; J6 G4 }7 ^
CD56单阳性的会是什么细胞呢？
" ]' p/ C$ L1 d& S6 k9 CNK？
6 R1 u3 M- J2 C  P4 I9 n. _! [但是培养体系中没有加入IL-15不会有什么让NK增殖的东西吧？
6 {% ~& a, h+ @. \2 Q# r: h! L. x& o. D( U( J" ^4 `
画门时隐约可以画出2个门，其中细胞数较少的P2倒是CD3阳性率靠谱，P1中猜测含有2种细胞，一种是CD3+/CD56-，另一种CD3-/CD56+，也像是不成熟的CIK和NK......5 \6 X" s: V, K2 ?  U

% y( }' r6 [, @+ d) N求大神们解惑，感激不尽~

nailute1985

我估计啊，NK细胞吧……因为NK细胞扩增的话其实不是一定依赖于IL-15的，单纯的IL-2就可以的~

FreeCell

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: K( E( H* h  C' `
9 W8 ?0 w9 \$ ~) k; [嘻嘻，做个同型对照再读结果

cjsbaicai

第四天时间太短，多培养几天看下。另外，CD56一个指标说明不了什么，判定NK细胞的标准时CD3-CD56+，这个你可以把横纵坐标修改下看看。此外你这分离培养的细胞云图太散，而且还分为两群，可以从源头找找原因看

baby00000003

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# r- v# G& u% o  _4 T' R8 K; k- q" X" ^) r) F( k
那个图就是说有一群为数不少的CD3-/CD56+呢......0 ~8 |! i, r4 P7 r8 d. a
当然至今我也只做过5个样本，这种情况还是第一次......1 [2 g, i: Q4 M1 u+ B
如前辈所说，且养着它看吧~

孙帅帅

D4 CIK细胞还不成熟~   等几天再做吧！

暖羊羊

楼主，我想问你培养CIK的时候加CD3单抗了吗？我们前期做过几次实验，以没有加CD3单抗为对照组的，分别在6d、14d进行流式检测，发现对照组CD3-CD56+细胞比较高，CD3+CD8+、CD3+CD4+比率都很低（应该大部分是NK细胞），扩增倍数也很低；实验组加入CD3单抗，CD3+一直处于95%以上，CD3+CD8+也明显升高。0 ~1 ~" f+ y5 \! y8 H  N
CIK是一群异质细胞，包括CTL（CD3+CD8+）、NK（CD3-CD56+）和Th1（CD3+CD4+），杀伤活性也是这几类细胞共同作用的结果。
% g) A  Q; S7 {: d- N  A" y. ?9 m/ e9 R另外，左边那个图是第0天的吗？我从流式图上没看出来刚分离的PBMC的CD3+表达率达到50%以上呀？

张钰0206

细胞的存活率测了吗？NK细胞还需要测一个CD19才能确认吧。流式最先开始电压调了吗？还要做一个阴性对照，结果才可靠。

baby00000003

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! e$ ]2 u& ]2 C) I" M8 g0 D. Z: _* l7 d# V' F; w+ b7 g
左边那个图是isotype，
- c! i1 a; \4 k当然加过OKT3，不然CIK长的少嘛~今天是D7，CD3+已经上来了，姑且猜测是个体差异吧,或者是实验时加错抗体了-_-......; p7 }! E8 \  R+ M+ K" \
D0的图没有贴上来....

hsu86

建议到13天是时候再测流式，第四天细胞还没刺激起来，时间太早了
4 T6 w; ^* s# g( w我也有过把CIK细胞养成NK的情况，有次做完流式一看80%CD16CD56，不相信又去了一次样，还是一样的结果，太神奇了，具体原因也不清楚