求助干细胞内毒素问题

jingjing6837

脐带间充质干细胞内毒素检测发现阳性率高，排除了外源细菌带来的内毒素阳性因素，求助有没有也碰到同样问题的朋友，如何解决这个问题的。这种内毒素阳性的干细胞可否用于临床治疗？

leeky10

你介绍不是很详细，不知是阳性对照（PC）还是样品阳性对照（PPC）呢。不过我可以作个大概的分析：3 g0 e1 s; S8 I% }7 l  j7 \! g
1. 如果PC成立，而PPC呈阴性，那基本可以判断是样品干扰引起的，解决方法是增加稀释倍数，用灵敏度更高的鲎试剂检测。当然也可能稀释也无法排除干扰，则需进一步处理了或者直接用兔法检测热原。
$ `! i; o& W2 e/ }+ m6 v% E2. PC、PPC均不成立。则最大的可能是内毒素标准品的稀释倍数出错，这里要强调的是对照品是稀释到2λ而不是λ，当然也不排除试剂出问题的可能性（是否做过灵敏度复核？）。- ~5 d+ [! |3 V* d' n
3. PC阴性，PPC阳性？这种可能性不大，如果真出现此现象，那解释只能是内毒素稀释倍数出错了，使其浓度处于鲎试剂灵敏度的边缘状态，加上样品中的内毒素就能出阳性了。
; c/ x* g$ l& V% ?, l( A6 i以上几点可供参考

meixue1130

不知道你是怎么取样的，是取的培养细胞的上清液还是取的用生理盐水重悬的细胞悬液去检测的。我们以前取的是培养液上清检测，结果阳性，后来发现我们用的培养基的内毒素就是偏高的，后来我们改用测用生理盐水重悬的细胞悬液就正常了。

奇幻雪蓝

江彩慧

我碰过类似的问题，可能是用的培养基有问题 出现了假阳性 我们换了一种培养基就没事了

snowny007

一般科研试剂内毒素都偏高，尤其是国外进口试剂，利用生理盐水多次清洗可以解决。

colins

目前我们对于脐带MSC的内毒素检测，取得是生理盐水洗涤液；记得前年用脐血血浆做过，全是阳性，后来还是用干扰试验否定了这种做法；可能你的样品里本身就含有干扰物质吧，建议你坐下干扰试验看看问题所在，现在脐带MSC 的培养已经很成熟了，一般不会出现内毒素大量阳性的结构

小猪32

回复 jingjing6837 的帖子
9 v' i7 O0 S" d4 H$ B1 m
( u) ?: e& {$ d) H6 t/ A正常情况下，内毒素的检测是针对于终产物的，即应该取的细胞悬液，所以在收集细胞前，对细胞多清洗两遍即可。

luckyliu

内毒素偏高是常有的事，主要是培养过程中的培养基或者其他的试剂中本身就含有内毒素较高，建议用注射用PBS洗3遍左右

ghx2005

如果细胞悬液各组分的内毒素都已控制，建议用临床级溶液多洗几次