如何提高慢病毒感染NK-92和T细胞效率

txy_love

如题，请各位有经验朋友提高宝贵建议，目前实验转染效率太低，在荧光显微镜下基本看不到荧光，求助ing。

zzyhelixinxin

细胞感染效率主要有以下几点需要注意：
: S* n0 I- Y% L) n) q' M9 `1.MOI值可以试着模式一下，一般慢病毒系统的MOI值在45-80不等；# I( J$ s* w( X$ e; u" V; @
2.细胞的状态也会影响感染效率，所以在感染慢病毒时尽量在细胞状态非常好的情况下进行；' e$ T  j% E: b/ h/ X  s2 R+ U) R
3.感染的时候加促感染试剂；# u1 Z! f! p3 D$ O! [1 P
4.病毒的滴度和纯度要高

txy_love

问题是实验室没有超速离心机，现在只能采用millpore的纯化柱，滴度测定也只有~10（7）IU/ml。除了polybrene、鱼精蛋白、旋转离心法，不知道还有其他的好方法，这几种方法试了，感觉细胞会死，吹打后无法形成克隆。

细胞海洋

回复 zzyhelixinxin 的帖子$ q$ C2 w: n7 W- w: K0 P5 H

6 f; a" e; x$ }看3楼

细胞海洋

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, r& @) _9 ~% w- B你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样$ z( L+ f  y; A9 c. U: P3 y
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否则他会看不到, R5 }  x: ^" W2 H2 D( S

txy_love

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4 |" N( N3 A* G# }. u问题是实验室没有超速离心机，现在只能采用millpore的纯化柱，滴度测定也只有~10（7）IU/ml。除了polybrene、鱼精蛋白、旋转离心法，不知道还有其他的好方法，这几种方法试了，感觉细胞会死，吹打后无法形成克隆。

zzyhelixinxin

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1 M# d1 R- m, O体外实验10（7）IU/ml的病毒滴度偏低，若你的细胞是比较难感染的细胞，这个滴度基本没有多大用处，病毒滴度在10的8次方效果会好很多。

txy_love

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, ^) A! P# Q& }; ~细胞的确比较难转，不知道你可用过millpore的纯化柱浓缩病毒上清？与超速离心相比，浓缩的病毒滴度大概要低几个数量级？

zzyhelixinxin

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millpore的纯化柱浓缩病毒效果不如超速离心，前者会损失很多病毒，一致导致病毒滴度偏低。建议找其他实验室借用超速离心机进行浓缩，或许你会发现效果好很多。

yuanyecat

你要用用life tech的病毒包装试剂盒吧，那个效率还是不错的。