请问细胞冻存时冻存液体积被稀释不准确怎么解决？

anzhida0823

      请教各位大哥，细胞冻存因离心管数目较多，冻存液体积比预定体积大的特别多，怎么解决这个问题？原本想用8ml冻存液冻存3管，结果重悬8个离心管后变成11ml, 无法用3个冻存管冻存，，，

dudumao17

一般是配好冻存液，再一起加进去。现在按比例再加，也行，若差的不适很多，也没关系的！

willamsunny

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: U- ^5 E  x+ {' Q. ^& E8 p
建议一般配冻存液的时候，冻存液配制成2X的，冻存细胞的时候根据重选细胞的体积加入等体积的冻存液混匀就可以了，比较方便。

青云之上

差的不多没事，每管少加点呗~~~

anzhida0823

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7 j1 S! c5 x" i. C% K. S& z( A
请问如果我用少量盐水重悬沉淀，然后合并到一个离心管中 离心后再冻存 这样损伤的细胞会很多吗？

hefan1234

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+ C  r2 r& w% K' U2 r3 s冻3管，你用的是哪种规格的冻存管啊，如果是2ml的，每管最多装1.8ml，8ml装3管装不下啊，如果用5ml的，那11ml完全可以装得下啊，不是很明白楼主的状况。。。一般我们实验室配冻存液的时候配20%DMSO的，目测细胞体积，用冻存总体积一半减去细胞体积的培养基重悬细胞，然后加等体积冻存液混匀来冻存的。

anzhida0823

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) M6 \: Z! H" |' d
6 n) ]: U/ f6 D. d我们现在用的是10% DMSO的血浆冻存的，没用用培养基。请问冻存用血浆好还是培养基好？我用的是5ml 冻存管，3支能装下11ml，我是想找到一个更能准确控制冻存体积和冻存细胞数的冻存方法，把现有的冻存体系革新一下，谢谢！

hefan1234

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) t3 w9 P: b' x% f6 r8 X$ t# B( Q) d
* ?% s/ e" f0 `! u6 N, }我们最终的DMSO也是10%，现有培养基的冻存方案细胞复苏后细胞活率一般在95%左右（countstar），活细胞回收率85%左右，但是用流式测细胞凋亡的话，细胞活率就只有80%左右了，关于冻存配方改良的试验我们目前还在做，发现用其他多种成分代替培养基，DMSO降到5%，也可以基本达到老配方的效果。。。

anzhida0823

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* f7 F: I/ V. e受益匪浅，谢谢！

luoye1986

我们都是先配好冻存液，然后再用冻存液将细胞重悬，再分装。