胎盘间充干的产量有多少？谢谢

willow0711

做了几次，胎盘小叶分离间充干细胞，总是存在两个问题，污染和产量低。
! {& [5 E/ g$ D: ^0 w2 A, J9 Y# I1、之前发贴请教各位大侠，我用含4种抗生素的PBS清洗，也用75%的酒精反复洗了3次，但是没什么改善，还是细菌污染了，无奈啊！不知道哪位做过的大侠可以分享下自己的经验呢？
$ W3 R2 ]- i8 L* i' z  S3 T2、还有个问题就是产量极其低，想问下有经验的大侠，你们分离的时候，一般分离多少克？得到的细胞可以铺几个25T培养瓶？或是几个孔板的孔？谢谢了！

sdudai

同楼主，我也想问一下各位大侠，怎么避免污染问题，我做的胎盘小叶分离间充干细胞也是经常污染。

uslzhang

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4 h: q( W* n( q2 {4 j7 `
  h$ r& f; u+ _2 K, b# u; K5 N5 H楼主不是存在什么理论问题，而是操作过程的技术存在问题，建议练好手艺，严格操作，去其它实验室观摩别人成功的操作规范程度。

willow0711

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0 \& y" ~- O0 p4 |2 M' R
$ m6 S* ]; H& z哦，只是没有这样的实验室可以去观摩啊

cantonchn

2 }9 w6 b' e; |$ S3 R
, E5 W$ U5 O/ s! R胎盘提取MSC污染几率很大，远不如脐带。
5 Y7 g/ V/ I  i; J
5 i6 W9 X% P) Z/ `4 y6 r! W并且胎盘中含有大量的前体MSC（即MSC的未成熟状态），这个东西个别公司称之为“亚全能干细胞”，目前尚无证据表明此干细胞与MSC有何本质的区别~~~

piano尤尤

所获取的胎盘本身来源的污染 这一点一定要尽量避免 如果开始就是无菌操作 那后续就基本不会有太大的问题( ~/ l, k# S. g0 }& W/ f) R# T
运输过程不要太长 取到标本后 封口运输$ o: e6 p/ H" Z& N
我所做的胎盘基本上是从产妇生产到实验室就一个小时
* P3 J) s, \4 Y& S6 I清洗就只用双抗 没有用过酒精
4 [. {; Z- o/ u做了几十次 就一次污染* U% ?$ L" l/ {" H5 Z
关于产量的话 你可以试试第一次消化贴壁的细胞的培养基 可以再次离心贴壁 8 ~( q* i: P/ p. \1 t

单个核细胞

回复 willow0711 的帖子2 T4 A: B+ Y5 }1 @
" `& e2 S8 F1 r
胎盘放在加有双抗的采集液里，分离的时候剪取5-10ml，漂洗去除血凝块，剪碎后加入酶消化，过滤去除未消化的小块，滤液用Ficoll分离取白膜，洗涤白膜后接种培养。5ml胎盘小叶处理后所得原代细胞应该可以接种一个T25瓶。! c& K4 Y0 b' T0 b$ r( U) p
- F! }5 z9 H1 [& A$ u" x3 u4 Y
注意几点：: u( R' L- V9 ~( L! t
1.盛放胎盘的器具应首先做到无菌；! S+ w4 H1 Q% |. M0 h
2.采集液加入抗生素；
8 X5 o' ~2 V1 }! Q! z* H0 X( v3.分离操作所需的手术器械、一次性耗材、试剂均应保证无菌；
4 k7 t  w# f- @) @- W$ h0 R1 r$ _4.建议使用一次性细胞筛网；
+ h8 M$ i" b" T( C7 R3 t5.注意无菌操作。

willow0711

回复 piano尤尤 的帖子% t7 G0 P8 u: |
+ o& D5 H) X1 T$ {
哦，谢谢4 ]9 w6 H" T7 `+ R# g, d! o: R1 A
每次都是人家装到袋子里面后给我们，不允许我们把无菌器皿带进产房！

willow0711

回复 单个核细胞 的帖子9 ]! g; D! }/ o! J! F7 f7 W3 I

4 Q" v2 B5 E) j; ^6 t$ r恩，谢谢

cantonchn

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3 H. `9 B  C& e* \. q5 ^5 a
' E3 {3 Q+ l' y! P$ `那污染的可能性就大了~~
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