脂质体转染一定要用无血清培养基吗？

jiangyinshen

求助各位高手，敝人准备做MSC转染，用invitrogen的lipo2000分别转siRNA和shDNA到MSC中，但是我现在手头上只有MSC完全培养基，没有无血清培养基，请教各位，在转染之前我能否用完全培养基来溶解siRNA和shDNA，还是必须要用无血清培养基来溶，谢谢！（ps：我这种培养基很贵且成分不明，没法自己配，经费所限又不能另外订购无血清的，请大家帮帮我，谢谢）

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用无血清的DMEM即可吧，或者买专用的OPTI-MEM，也不是很贵，以下是我们的转染步骤，仅供参考：6 x& R# X0 L: B1 s) T& r) q0 t1 n
(1)        细胞铺板：转染前一天将培养瓶中细胞用0.25%胰蛋白酶消化，接种至6孔培养板中，第二天待细胞长成单层即可进行转染。* T& R8 M8 y2 @5 J  j# ^  g
(2)        溶液1：245 μl 无血清DMEM + 5 μl 脂质体2000 （总体积250 μl/每孔），温育5 min。% _; ^1 b1 i% K- K8 B3 y( s
(3)        溶液2：245 μl无血清DMEM + 5 μl siRNA（100 pmol）（总体积250 μl/每孔）。
2 s( \: Y. W3 ]  _(4)        将溶液1与溶液2混合，室温下放置20min。* G5 h9 \& K+ _, ?! [
(5)        将6孔板中的细胞用无血清1640冲洗两遍后，加入1.5 ml 无血清培养基。0 g5 {; {( L3 f# B
(6)        将溶液1与溶液2的混合液逐滴加入孔中，摇动培养板，轻轻混匀。37℃、5％CO2培养5 h。, D, \0 B7 T3 @1 u3 P
(7)        吸弃转染培养基上清，更换为10%血清的1640培养基，37℃、5％CO2培养48 h。- O$ y( c. x  T4 [7 x" j% O6 ?

& L3 H, A5 O3 W, W# ~  Z; G不过，MSC用脂质体转染的效率好吗？
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luyue6453

回复 jiangyinshen 的帖子! l8 n9 l3 I6 m
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用opti冲一下就可以，孵育20min就够了，不用培养，你把准备转染的细胞用opti 洗一下，再取适量孵育20min'就可以转染了，转染后6h换成你的完全培养基再培养24h就可以测转染率了，不要等太久，当时衷心的说脂质体2000转染效率很低。

wf78365421

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$ Y8 e$ H! m5 y: _5 X: ]& a% L可以用完全培养基来溶解。