请教脂肪间充质干细胞的培养基问题

xuyang0317

我是最近开始接触脂肪间充质干细胞的，请问培养脂肪间充质干细胞的培养基除了加10%的胎牛血清外，要不要添加1%的青霉素100U/ml和100μg/ml的链霉素？
! ]4 G, w. s9 S* v3 K+ V0 r) n我查阅了很多资料，最近的文献都只提要添加含有10%的胎牛血清，但是又在早期（2009年之前）的文献中看见要添加青霉素和链霉素，请教下各位前辈，培养脂肪间充质干细胞的培养基是什么样的？
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iytbxxg

加不加抗生素是你个人的问题，加抗生素只是可以减少你发生污染的可能，如果你觉得你的实验条件够好，个人无菌操作没有问题可以不用加，如果你怕污染就加抗生素吧。但有一点是抗生素并不是万能的，即使你加了双抗，个人的无菌操作还是要注意的。

avbn

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$ p8 A9 f  w: c3 ?- s" t/ |加抗生素主要是为了抑制细菌生长，这主要看你的脂肪来源，如果够干净够无菌可以不加抗生素。如果不放心可以加，但这也只是概率问题，还是要小心操作。分离之前可以用带抗生素的液体多浸泡，洗涤几次。

gejianyun

做研究，特别是刚开始做，建议添加吧，等以后做熟了，想不添加也行。

xuyang0317

我们实验室的环境很好，那就不要加了，我最近用酶解法提出了些脂肪间充质，用的是II型胶原酶，用量是1：1，文献说的是用Ⅰ型酶，请问这些有影响吗？还有的培养液是高糖的，文献说的也是低糖！纠结后面会不会出问题！

xuyang0317

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我们实验室的环境很好，那就不要加了，我最近用酶解法提出了些脂肪间充质，用的是II型胶原酶，用量是1：1，文献说的是用Ⅰ型酶，请问这些有影响吗？还有的培养液是高糖的，文献说的也是低糖！纠结后面会不会出问题！5 t: e% z* \- T$ I: x
    还有谢谢你的指点

iytbxxg

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& F+ [" w, Q' a. u  V+ p$ n% N# B% F! b; e6 Y
用什么酶我就不是好清楚了，我记得以前公实验室用的是4型胶原酶，这个主要看胶体来源，不同的胶原用不同的酶消化会效果好一些，但大多数是可以通用的，酶消化的终浓度要自己查，我不是记得好清楚。酶液最好可以把胶体盖住，一般采用1比5。
" p% \% `' Z, d7 E8 c* q胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞专用胶原酶，要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型，常用剂量为最终浓度200U/ml（约为1mg/mL）或0.03%~0.3%。胶原酶Ⅰ用于上皮、肺，脂肪和肾上腺组织细胞的分离。用于消化组织中连接部分使其成为单个细 胞，用于哺乳动细胞的分离。胶原酶Ⅳ包含至少7种蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它能消化多种组织。胶原酶Ⅴ包含至少7种蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它可用于胰腺小岛组织的分离，将结缔组织分离成单个细胞。胶原酶Ⅱ适用于肝脏，骨，甲状腺，心脏和唾液腺组织。
5 a7 P: e2 X- Y! n' m脂肪干细胞胶原酶是I型 质量浓度0.1%，37度消化30min-1h。

xuyang0317

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( X* R' l) d/ _* K, n
4 \% j  y( a. d$ S7 L这些东西我也查看过，关于分离脂肪干细胞的文献都是用的Ⅰ型酶，而我用的是Ⅱ型酶将脂肪ADSC给分离出来了，就是担心后期有影响！

iytbxxg

回复 xuyang0317 的帖子; C; T3 C% Y4 @4 N5 ~, [# T. D8 A* ?2 j

5 M5 A3 L- n6 d问题应该不大，我觉得各个酶之间都可以用，只是分离时效果不一定很好，我平时都随便用酶来消化的。

xuyang0317

这是我分离出来的细胞，暂时只种了一瓶T75，下面附图第10天观察的ADMSC照片，挑了3个典型的传上，这3个照片都是在同一个培养瓶里面拍下来的，用的培养基是高糖的，这样培养下去，会不会在达到80%的可传代之前就全部分化了啊？我下步打算一传一的