脐带间充质干细胞培养问题

shuimochunlan

请教，都知道在脐带间充质干细胞的传代培养中，需要消化后吹打均匀传代，才能生长的好点，我们在吹打的过程中，总是遇到细胞成片脱落，形成膜状，较难吹打均匀，请问造成这种现象的原因是什么？是因为消化时间太短？酶浓度不够还是别的什么原因？怎么解决？（我们是用的0.05%胰酶，消化3-5分钟，在培养箱内消化的）

winstonsee

传代密度过高、胰酶消化时间过长都是原因吧，刚开始做的建议在显微镜下观察，接种密度和消化时间对细胞的生长都很重要，接种密度过密导致生长抑制甚至分化，过稀导致生长缓慢甚至老化，胰酶消化时间过长会导致细胞损伤，影响细胞的生长

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我听过说养间充质干细胞，宁可消化不充分，也不能过度消化

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回复 xiangxu 的帖子* H4 E# g- R! O8 g4 i! D# d9 {9 O
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这么高的浓度，应该1-2分钟就可以了吧! W3 }  C/ g$ r& P  {" K

蚂蚁上树

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消化时，细胞成片掉下一般是细胞长过了，建议根据细胞生长速度估计传代时间，一般间充质干细胞状态比较好的话，要尽早传代，还有就是胰酶的浓度是不是太低了，我们一般都是用0.25%胰酶消化，脐带间充质两分钟消化就差不多了。

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首先，应该是长过了，其次，你的消化液浓度较低，导致消化时间偏长，把消化液浓度提升到0.1左右，这样你就不需要在培养箱中消化了，尽量减少消化时间，消化过程对细胞有伤害的。

neng172

1、细胞长的太满的，下次长满80%左右就要传达了) \3 d1 b( K2 F: d+ k5 B1 r) U
2、或者改用0.25%的胰酶消化  

维维睡啦

原因：你的细胞长过了，没有及时对细胞进行处理造成的。细胞融合率高，细胞排列过于紧密，细胞与细胞之间粘连结实。消化时，细胞成块脱落，粘在一起形成膜状，消化的时间再长也是没用的，反而会伤害细胞。不过这种现象可以继续传代，传代比例可以稍微加大。" z+ T5 w2 i& f, l
解决方法
) ?2 A3 L+ w% `2 K, M2 G  }1、以后培养时，细胞融合率达到80%左右即传代。- n9 m! G/ Z& w+ K
2、加大传代比例。
: x5 e' l7 t" ]1 k: t3、适当减短细胞培养周期。; c8 ~* ^) B8 C' i1 R# p
4、养成经常观察细胞长势的良好习惯，及时对细胞进行处理。

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回复 shuimochunlan 的帖子# i: d9 z5 ^- S( C
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细胞长成膜状，是长得太满，消化时不容易成单个细胞消化，培养传代时这样的细胞不容易贴壁

小样

回复 细胞海洋 的帖子
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恩恩，谢谢