请教：小鼠iPS传代方法和分离方法

damaoshu

向各位请教：
! N2 T" K7 U' D7 p" I! J# f1 小鼠iPS传代方法有哪些？
3 e! [! ~! s7 ^5 o0 Q! N  _# H我所知道的是在饲养层细胞细胞上进行的-首先挑取colony，然后用胰酶消化，终止，离心重悬然后再接种于饲养层上。还有其他的方法？如不用饲养层或者用胶原酶消化（再用胰酶）消化的吗？2 A# H3 o/ j+ i  r. \
2 小鼠iPS分离方法：' K- p% v- f2 y2 d
我知道网上有用差速帖壁来分离iPS和饲养层细胞的。还有其他的什么方法吗？5 q3 y) e# W! n; g; {1 a/ t
; v7 Q" ?6 o( }, k2 h; L4 L7 B
最后有一个问题，用差速帖壁得到的细胞能用来做western和免疫染色吗？9 [6 ^4 O+ B# o7 P5 b
谢谢各位。

chunlanchen

IPS传代方法：除了第一次挑取克隆，其他时候传代和普通方法一样用胰酶消化，这方法不会有什么问题，除非到了后面细胞有分化，就再挑取单个克隆再传。如果不用饲养层，就要使用不同的培养基。
. j/ ]- I! @5 X. Q+ V$ O, _IPS分离：我们用的都是差速贴壁，这样分离的细胞可以做western和免疫染色

damaoshu

回复 chunlanchen 的帖子
* U2 V( M. W# I9 d* t" b
& Z$ g- Z8 C  s% R谢谢你。我知道人的iPS有三种经典方法：feeder dependent, feeder independent and conditinal medium. 我不知道在小鼠也是这样吗？

chunlanchen

回复 damaoshu 的帖子3 p. f& p* s- J2 O$ G

0 u% f% q" j% d+ d5 A8 O5 ?% u也可以的，小鼠ips比人的ips容易养，但是我养鼠ips一般都在feeder上，无feeder培养的ips总觉得状态没有那么好。