慢病毒感染感染过后细胞怎么成这样了？

wangshumin12311

没错是使用BD的matrigel，不是我采购，不太清楚货号，5ml配200倍稀释的可以配1L，足够你用一年的了（200倍稀释包被时间长一些，2h以上），死的多另外的原因是感染后不要立马换KSR medium，需要用DFBS medium养一段时间，或者使用E7一段时间，或者其他的培养体系，慢病毒的毒性的确比逆转录病毒大一些，多做几次找到合适的条件就好。

huangcong1988

回复 wangshumin12311 的帖子  D  c) o/ `( l6 {: o/ J
3 S5 I# j) J4 v# s" P" G& _
非常感谢！受益匪浅。:handshake

前途似锦

我也怀疑是培养基的问题

frankieisme

你这事在做reprogram吗?
( ?" o  m0 B# N) u. u- A如果是的,必须有高表达LIF的MEF细胞株做feeder.你这个图片看不出有feeder.还有你这MEF是第几代?一般第五代以后基本上家iu会出现这种自己死掉的现象,还有如果密度太密了,细胞也会很快就死掉.

huangcong1988

回复 frankieisme 的帖子9 U0 E8 y; _; u1 F
% s" w- E8 p2 [
我这不是用MEF做的feeder，我这也是Fibroblasts，我不做小鼠ips，我做其它物种的，但是我不知道细胞形态在感染过程中什么时候开始出现变化，就是感染后的细胞在第几天的时候出现聚集，第几天的时候出现colony，然后我又感染了一批，细胞里面感觉很脏，换液之前PBS洗一遍，但第二天细胞里面有感觉很脏，这是什么情况呢？

gexiaoyatou

想问一下，你这个问题已经解决了吗？我用慢病毒感染心肌细胞也出现这样的死亡形态，就是还保留细胞正常生长的骨架轮廓，但实际上已经死掉了，也是找不到原因

细胞海洋

回复 gexiaoyatou 的帖子
% n! V5 s/ j6 T9 z; p7 x. ]9 M- O) X: g( O
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bulu1234

慢病毒感染一天后需要换成完全培养基 休息一天 再进行下一次感染 不能让病毒液在细胞培养体系里面停留太长时间

未来之星

回复 huangcong1988 的帖子( @! g. b/ O& O9 \+ [7 i) l2 ]

9 ]! R: Z7 U& _6 P, F你好，我最近细胞也出现这种情况，不过我是单纯养的MSC，用的培养液里面加的FBS，细胞第四天正常，第五天就出现拉丝现象，是不是FBS有问题

奋斗的时光

饲养层状态良好，即使再怎么换ES培养基也不会有问题。1 `* {2 U2 O1 J- y; d  |
问题应该出在感染后的细胞上。
3 c' a( _; v" x9 c看饲养层的状态，应该是转染后的细胞转移到饲养层上的时候，带进去了一部分病毒，这些病毒导致了饲养层细胞的病变，从而出现抽丝或者剥落的现象。) x/ B0 ?  M$ |" ^# L: K" q- [
建议检查一下转移步骤，切记不可带入转染细胞的上清。
% u- e. {5 S! I1 F1 D* {5 c另外，转染后不健康的细胞液会释放慢病毒，但这一点影响不如上一点大。9 d3 E2 w% H0 L
以上仅代表个人观点。