关于NK的讨论

ljl1988115

不知有没有做过NK细胞的同学，不知道大家是怎么养的？希望做过的同学能解答一下，我看文献上有用滋养层细胞的，不知是什么情况，有做过的讨论一下吧！

wwxx66

国外做的很多都是用饲养层细胞养的，K562细胞经基因工程改造，可以表达一些膜分子，在膜分子的的作用下，NK细胞可以大量的增增殖，最大扩增倍数可达到21000倍！国内也有很多专利讲到这些东西。你可以去国家专利局网站上查找。

weijunning

可以不用饲养层；选用德国产的一种用于NK细胞培养基（比较贵，2000元/瓶，500ml/瓶），选用关键细胞因子IL-2，OK432，可以进行很好的NK细胞培养。

永远的伊凡

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能不能讲具体点呢，像需要加的因子的量、加的时间先后等等

yangpan521

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* H* B3 C* s# l- S2 J. A; I( v! [- A; X% b7 Z7 Z4 _$ S
能不能发一些相关的信息呀，比如饲养层的选择、因子的浓度等 最好有相关的文献 谢谢

weijunning

回复 永远的伊凡 的帖子5 s! ?8 m" n: e( b; P( L0 f

" i/ ?$ n5 I0 |OK432有配套的溶剂去溶解，1g用一支配套的溶剂去溶解就行，配出来的是1000X母液；需要铺细胞当天加；IL-2的工作浓度为1000ug/ml  在当天加；之后扩瓶培养基只加IL-2因子就行。

永远的伊凡

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( `- q8 ^% o7 p4 I/ Y- V  p很有用，谢谢！

zhenhuale

回复 weijunning 的帖子- ?, u3 y. H3 j- M; X/ J" L* M
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我用德国的培养基和OK432都试过培养  有文章也报道过该种培养方法
! z$ r; ?# B! P$ H# O. g但是培养效果不理想，请问您培养多少天可以得到多少的细胞量，CD3-CD56+比率多少？谢谢！

weijunning

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6 j  M" i' D6 o3 ?5 J6 F, H) e我们正是用此方法培养的NK。一般在第10天才开始进入快速增殖期，之前增长比较缓慢；由于其对数生长期滞后，回输我们定在第15天，这时细胞数能达到2.0X109左右。CD3+CD56+一般在35%左右。

ljl1988115

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NK的表面标志抗原应该是CD3-，CD56+吧，双阳的话不就是NKT了吗