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之前我们医院实验室里western始终出不了结果,蛋白带非常乱,背景一片混乱,做细胞时还好一点,跑组织榈根本是乱七八糟,当时找原因,几乎把western的每一步都进行了排查,可结果一直不理想 u7 r8 z$ L9 K( @! p8 y
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后来,无意中我用相同的样本,在别家医院实验室做,结果很好,于是,就怀疑到了loading buffer中的belta 巯基乙醇上面,原来,我这个实验室的一个博后,半年前一次性的配了一大瓶的loading buffer,其中加了belta巯基乙醇,一般来说,loading buffer都是室温保存的,所以他们也没有放入到冰箱里,但其实,belta 巯基乙醇有很大挥发性,应当现用现配,就算是室温保存,也不应当超过30天,超过30天后应当再补充,这位博后配了这一大瓶loading buffer之后立即就加了belta 巯基乙醇,但很长时间没人用,当实验室里人开始做western blotting的时候,又没有及时补充belta 巯基乙醇,也没有加DTT等其它还原剂,而且loading buffer每次用量很少,这一大瓶所有人都在用,但没人想到此时的belta 巯基乙醇已经挥发的差不多了,所以几乎没人能跑出很好的带来& n) g q7 h4 Z+ M) E8 r9 q0 x& h
2 M! Y$ q! _2 i* _我重新配了新的loading buffer之后,大家这一段时间以来结果都不错,经过这件事情,深刻感受到了实验真是差一点都不行啊,一个小环节出现问题,就可能导致整个实验失败
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我现在加了belta 巯基乙醇的loading buffer,都保存到-20,这样保存时间应当会延长很久了
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