关于干细胞染色体核型分析的一些问题

SKC-SFC

近期在干细胞染色体核型分析前，在制备染色体的时候遇到以下情况：
" k4 {' F- E( ?7 x+ J! G: G4 Y1 n1 .不知道怎么选取细胞，过早则看不到任何染色体形成，太迟形态也不对
; u9 H/ T% j; N- V! ~3 `2 .最大的问题在于低渗处理的时候，没有办法破膜。
1 ]. f& g7 g8 j9 I求助：1.如果选择用于制备染色体的细胞
. U% B0 K* o: i2 H* f5 z           2细胞低渗处理方法如何优化？: g- }( Z- m& P; g) l
谢谢各位i！

SKC-SFC

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突击兵之小土豆

1、用秋水仙素: [/ S9 S+ `, @: q% A3 L/ \
2、自己配低渗液，KCL好像是

xbs530515

选择的细胞，必须在对数生长期，这个就要根据你的细胞本身的特性，以及接种的密度都有关系了。你可以考虑一下取24h，和48h的比较一下，一般细胞都是这之间。实在不行的话，估计就要做个生长曲线来确定一下你的细胞的对数期。( ~0 X2 t  G1 f: C4 L
我认为你第二个问题也是因为没有选到对数生长期的细胞造成的，一般的话，低渗还是比较容易。你做个梯度，20min，30min，40min试试看，一般也就是30min就行的，所以，还是应该摸索一下你的细胞的对数生长期才是最关键的。

SKC-SFC

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8 ^  v( }" T! U% B- L+ h3 s
嗯，说得有道理，第一次有40%的细胞是可以看到分散的染色体，形态也很典型，固定和染色都不错。但第二次的实验结果失败，选取的细胞是36小时的细胞，低渗和固定后看到的细胞里看不到染色体的存在，低渗的话应该只是胀大，并不需要细胞膜破掉，我用的是KCl0.075M，作用时间为30min，秋水仙素的使用浓度为终浓度0.45ug/mL。

突击兵之小土豆

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8 K0 S- q  L4 \+ X
, W% U2 n2 h: F/ Z: J' H6 }# @; Q     能看到分散的染色体，关键是滴片，注意利用热胀冷缩，具体方法不透露了。只要掌握好距离滴片，一般很容易的。

SKC-SFC

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3 G. K% o7 H) J/ \- c
嗯，说得很对，不过距离太高貌似滴不准

突击兵之小土豆

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2 r! h2 C+ q" V0 W' e' w2 Y0 x
& N9 ]: _2 k) J1 S8 v1 V7cm左右吧，一手拿吸管瞄准，一手拿冷的载玻片（注意要有雾气，没有立马不要），瞄准，然后快速滴，不管滴的怎样，快速滴20个板，最后画圈，用松脂封片（我个人比较喜欢松脂，本来还想手工做个琥珀呢）。熟能生巧，多练就越来越准的。加油啊8 x! N9 J7 b' w+ _4 A% R! k6 T' y
9 l3 Y) ~# U" N' C4 L. Y6 c: H( ?
这个方法是老师傅的方法，不外传的，我说了。一定要给我很多威望和包包啊，要不对不起我啊！！

突击兵之小土豆

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$ y! I+ B6 ^5 o) G6 ?5 {
$ N! B2 N7 a+ ^8 m70CM   打错了   

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7 h' \7 k% `; ?+ J! a70CM 要滴准，那技术得多精湛呢，而且滴片还是应该先滴一片，看看大致的细胞密度吧