关于干细胞染色体核型分析的一些问题

SKC-SFC

近期在干细胞染色体核型分析前，在制备染色体的时候遇到以下情况：5 m& F9 o  W, L- J) f
1 .不知道怎么选取细胞，过早则看不到任何染色体形成，太迟形态也不对0 Z  g2 F2 i$ e- E; Y1 c! _
2 .最大的问题在于低渗处理的时候，没有办法破膜。
. o( T! q3 g5 Q/ {% m* n' v; [/ i求助：1.如果选择用于制备染色体的细胞( ]9 S4 P4 @* Z2 A# z- a
           2细胞低渗处理方法如何优化？& F$ u/ }2 b$ N8 j# V! P& J
谢谢各位i！

cartoonyang

Briefly, actively proliferating cells were incubated with colchicines (0.1 lg/ml) for 4 h at 37 _C. The cells were washed twice with DPBS, trypsinized, suspended in a chilled hypotonic solution (68 mM KCl) and incubated for 20 min at 37 _C and then fixed for 10min in chilledfixative (methanol and glacial acetic acid, 3:1). The pellets were suspended in 5 ml of chilled fixative for another 10min. The metaphase spreads were prepared by dropping the cell suspension onto ice cold glass slides.
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网上找的，我准备用这个方法试试。供分享！

cartoonyang

) x" U+ a4 k8 z, R5 P: S! g

4 F2 j% w0 l6 @( Y! L4 n6 F2 k: e很好的帖子。. ~) L, J- U  `0 J7 e9 ^, G' c
我之前做了很多体细胞的核型分析，分散效果一直不好。我在想，可能当初我没用预冷的载玻片有很大关系。/ c( ~4 ?! |" p4 }& C# w
谢谢分享！！！

184lj

只做过体细胞的核型分析，取对数生长期的细胞，终浓度0.4ug/mL秋水仙素处理2~3h；KCl低渗液处理；3:1甲醇病乙酸固定液固定细胞；调整浓度 滴到-20℃冷冻的载玻片上（高度50公分就差不多了）。

突击兵之小土豆

回复 labghost 的帖子( [+ D( J( B6 l& Z8 U
' u) e, `5 K8 C0 N# B+ x
氯化钙 我们倒是没加过   很多东西没大家想象的那么难  我记得我们小时候玩弹球  就用弹球拿起来 点射别的弹球   个人表示无压力  小时候玩弹球很准的 哈哈

labghost

将近一米的告诉滴下去，把一滴液体滴在一个载玻片上，7101,7102都在10cm²左右，能那么准，这技术真不是一天两天三四五六七天练出来的哈。

labghost

回复 突击兵之小土豆 的帖子" P  e8 o4 _3 F" G0 @' x9 A8 m: P

" z- K, j3 d! Z; i要是再有点氯化钙就更好了。

突击兵之小土豆

回复 SKC-SFC 的帖子) M5 w6 K4 {$ C  V: E- }6 v( D: b

/ D1 L8 g1 m" z利用热涨冷缩原理，载玻片事先放盒子里，在滴片前都是放在冰箱里，你滴完片，是要先封片的 ，观察一下，好的留下，不好的丢弃。即使你用软件进行核型分析，也会在处理数据时删除一些细胞图片的，不是每个图片都利于核型分析的。

SKC-SFC

回复 突击兵之小土豆 的帖子7 Y5 |# V  g% d4 B1 Q
- o( i% x& z2 X4 _8 S
70CM 要滴准，那技术得多精湛呢，而且滴片还是应该先滴一片，看看大致的细胞密度吧

突击兵之小土豆

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* W8 r0 n9 D, o, v- j! e( Q6 D6 u  q8 Z  D2 P1 Y3 ~4 z* _" {
70CM   打错了