为什么神经球吹打传代后，状态很差

jessewill

原代培养的神经球吹打50次之后，在显微镜下看球基本上被吹打成单细胞，48H之后产生一些细胞球，但是感觉球的状态非常差
( ]& s, Q7 I: F3 Y3 e  t! p% K% G: H8 E8 |) A2 R/ L
1.球周围不圆润7 [1 O: F6 X& d3 [5 u' S+ Q1 O
2.球的立体感不强，像很多细胞粘在一起，没有神经球的立体感
$ {% c: J- ~- E3 p2 l1 H! O, R5 t) F% b) e
为什么会这样？我才传第二代啊，求解释

细胞海洋

建议上图

zpzp0312

聚集生长的细胞都会有这样的问题; ?/ r7 R: T1 K1 L  K* F& X
建议用机械法传代
' s  I$ C% J8 ]7 X' P( W或者使用胶原酶多作用一段时间7 ~' I# q" R: e1 \  }
胶原酶比较温和

jojomayer

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" j/ D- T$ K1 P6 f1 w# G+ w9 q( O7 n  Y- R% O9 I+ v5 f
请问您说的胶原酶是Accutase？

zpzp0312

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7 [5 m# d4 z: }3 A# `
8 {$ @( j4 C: ?. \, q7 t2 F& P( F是传统的胶原酶
. E6 Z2 o8 }4 B1 f; taccutase也是可以的，但作用似乎差一些，如果可以在消化后使用机械力choping也是可以的。( @- Q! c& B1 [. [# D/ u
通常来说accutase主要是作用于活力差的细胞类型。如果是单层生长的细胞效果比较明显: t' K& p8 }: W9 ^  A& i
你可以先用传统的胶原酶

ss安雅熙

我 的神经球 机械吹打根本不能成单细胞 我的原代培养密度10的6次方，4~5天就能传代 球很多 制备单细胞比较困难  但是消化成晓得团块即可 这样长起来的时间就会比较快 单细胞可能长的慢些

招财鼠

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% G5 o! v9 X$ X" n& z
; `. w/ ^2 F- p! L- [神经球打散传代以后可以成功进行贴壁培养吗。。。。？？？

xiangxiaoliang

神经球用Accutase 37度消化5min后，800rpm，3min 离心去掉accutase；再用加200ul完全培养基，用200ul枪头吹打20次；最后加800ul培养基，计数。一般48h后形成的球是跟你描述的差不多，五天左右球的形态就很正常了。