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二、关于胚胎干细胞、iPS细胞特性会议发言:$ |; J" d) q# {3 x% j. F
1.周 琪,中科院动物所研究员
: u. L" N3 I, }3 F$ @7 E题目:iPS细胞发育潜能及安全性评价
9 [5 w& X( r& C2 b7 D( _(1)开场白继续回忆几年前听干细胞报告人如何少,现在的听众如何多(听过周琪多次报告,几乎每次都提到此事)。提到973首席今天基本都参会。2 V; ~6 \1 g8 g% R# J0 Y
(2)发育潜能的评价指标:核型的检测,体外传代能力、体外分化能力,体内传代能力,形成嵌合体能力,四倍体补偿能力等。通过四倍体补偿回答了iPS多潜能性问题。
& d. T2 W+ O7 _: R4 {7 S(3)对iPS致瘤性的研究几乎都是来自于嵌合体。继续回忆“小小”鼠的工作。5 y2 ?/ e& W, {) X1 Q8 \
(4)IPS来源的动物发现肿瘤的发生,而这些肿瘤都可以检测到外因子的表达。这些外因子的插入可能是肿瘤发生的元凶。) a( O' [' n# L2 d, u
(5)检测几种不同方法得到的ipS,如C-Myc free,Oct4单一诱导的IPS,研究发育的比较。是什么决定这些不同来源细胞的发育功能目前不清楚。
3 K- M; ^, x+ L" D; A(6)向神经干细胞转分化的工作,评价其安全性。
+ ]$ G& Z; C8 U) \. P(7)介绍去年发表在JBC关于miRNA的工作。: ~/ `2 ?( s- `, f- a1 w" j
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2.裴端卿,中科院广州生物医药与健康研究院研究员
; v, |6 L( e, E1 j, T; @! t% A* Q; q题目: Reprogramming: A look at Vitamin C- C5 Y4 ]: D. a5 I: n( p
(1)回忆过去10年所做的工作,研究Oct4调控ESC的网络,转录因子间作用等。非选择性iPS诱导系统。, J- l% p' g1 M$ z0 u1 u5 ]- z
(2)与张毅等实验室合作,发现维生素C通过组蛋白修饰增加体细胞重编程,通过减少H3K36me2/3水平影响重编程。文章近期将发表在Cell Stem Cell。6 X2 y8 q4 m8 a& D: L# q& d
(3)维生素C通过影响Jhdm1a/1b基因发挥其作用。
1 z# P# G3 ?9 Z4 T; j(4)用单因子Oct4可使细胞重编程,3个实验室:丁盛、邓宏魁和裴端卿同时发现这个现象。但效率很低,改变H3K36me2/3后可增强单因子Oct4重编程的效率。
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, {3 n$ O- I8 {" R, {, X1 P3.高绍荣,北京生命科学研究所研究员 r( y3 v2 S, W- ]! `% l
题目:IPS:Molecular Mechanism and potential application) o2 S6 K6 A- F/ _# P
(1)理解IPS多能性和机制方面的工作。介绍四倍体补偿实验。使用的是inducable vector进行iPS制备。使用小鼠脂肪细胞进行reprogramming,获得的iPS进行四倍体补偿实验。四倍体补偿获得的小鼠的脂肪细胞(或者血细胞)再制备iPS,然后再进行四倍体补偿,连续进行了6代,以证明iPS的全能性。
+ Y9 l- E& _& b+ I" f8 R(2)使用RNASeq、miRNA-Seq、ChIP-Seq H3K27、DNA methylation-Seq等方法,分析不同代次、不同来源的iPS,以研究其DNA甲基化等表型的差异性。
: v: _7 S0 j/ }& O# Z+ r ]( h) {2 i(3) 介绍用iPS治疗疾病方面的工作。以beta地中海贫血(阴性遗传单基因疾病)为疾病模型。1 P7 k2 X1 d( d3 r
(4)使用同源重组方法更正iPS细胞的突变基因。比较更正前后基因表达谱的差异。分化iPS向造血细胞分化。证明基因打靶可以修复某些遗传病。2 v7 x/ i5 k5 Z
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4.邓宏魁,北京大学生命科学院教授" V3 J, Y* q9 [; _. S7 d! P* A
题目:建立多潜能干细胞以及向胰岛分泌细胞的定向诱导分化3 K* h* u$ Y5 r% I
(1)建立iPS时,使用CMV启动子drive EGFP,若局部区域无GFP表达,提示该部位细胞发生重编程,因为CMV在ESC中沉默,不能驱动GFP表达。% f( E0 X& x+ |! _& ^7 a1 \5 N
(2)建立一个新的人iPS基因组合:Oct4、Sox2、Klf4、UTF1,后者是新的重编程因子。发现P53是体细胞重编程的主要障碍。+ O* h4 s" f9 ]& h, a: e
(3)小分子化合物筛选导致重编程的分子,包括组蛋白去甲基化抑制剂、组蛋白乙酰化抑制剂等。同时抑制重编程的主要障碍因素能增加重编程效率。
2 ?4 r* w" S4 D# {- r- P(4)建立单基因Oct4诱导重编程体系(Tet-On Oct4)。建立新的vector free和高效的重编程体系。: x7 r6 n3 w6 |4 g' ~) f" U( `, f
(5)诱导ES向胰岛细胞定向分化。建立大动物猴子iPS和疾病模型,进行糖尿病大动物实验。6 j6 P/ S9 p5 r& p1 F
, C+ |8 |& W. Q7 Z, [6 b5.金 颖,中科院上海生科院/上海交通大学医学院健康科学研究所研究员
* `) S! _+ K v. `题目:转录因子Oct4蛋白质泛素化修饰与多能干细胞分化和体细胞去分化。% u! ?6 X( ?' J+ Q
(1)过去10年一直研究与Oct4相互作用的蛋白质和它所调节的靶基因。Wwp2蛋白泛素化酶,能泛素化Oct4,也抑制Oct4转录调控(2004年发表在JBC)。+ s `9 R |) p! S0 _+ m6 u
(2)Oct4也被SUMO-1修饰。- K+ O' Y/ T) v2 A x6 Q/ K u
(3)研究Oct4被泛素化修饰后的作用和结果。7 Q$ [) g: u& c+ d5 T! L" \9 o
(注:金颖老师此次终于没再继续讲“如何建立人的ES细胞系”。)
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6.肖 磊,浙江大学动物科技学院教授
9 @) U/ b3 h& Z. T q题目:ES/iPS细胞和转基因动物研究7 R3 o- ~( N B
(1)建立猪iPS和利用猪iPS建立转基因动物模型。
/ i& ]3 H h1 ~8 g! G(2)介绍小鼠Knock-out过程。因某些动物无ES细胞,无无法进行基因打靶工作。介绍建立大鼠iPS工作(已发表在Cell Stemcell)。& [" O) w4 Q s# u. ^, D
(3)使用可诱导性vector建立猪iPS,并进行鉴定。使用猪iPS制备嵌合体猪需时间较长,故使用核移植方法建立。
4 ^3 ~- r) ~) @/ f. c(4)全国多个实验室建立“猪的联盟”,共同研究猪。已获得嵌合体猪。! @ D4 s! }/ j! i g$ y5 b9 d, a
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7.卢光琇 湖南医科大学人类干细胞国家工程中心题目:各种遗传性疾病的干细胞建库向血小板诱导分化
& y' n( `* b0 l/ v(1)已建立285个人ESC细胞系,是世界上最大ESC提供种子细胞库。每年进行试管婴儿1.3万,今年进行了1.8万。0 [. f3 w8 J: T; y1 r- p* p
(2)与骨髓库相匹配,有600个ESC可满足湖南7000万人口需要。6 P! r% n6 ], q- G
(3)使用iPS细胞进行遗传病研究,重点是血小板无力症。2 m/ z: o4 E% G# T& q4 ?7 `
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