求助：成纤维干细胞原代培养

OBGYNob

不做实验不知道，一做实验吓一跳！原来自己真的什么都不懂....9 M# C* ~  ~! n+ R, t/ s
最近师傅又打算让我做成纤维细胞的培养，再做成iPSCs...打算用体表疤痕做材料，查看文献上说：可以用0.25%胰酶37℃消化30min以分离表皮与真皮。但是我消化之后表皮还是很难分离开啊，而且下面的真皮层好像不是文献上说的可以剪成0.5mm碎块，而是一坨...没办法很好的接种在培养瓶上啊{:3_60:} 9 u- l, L% l3 @" c! r
请教各位高手，真皮层消化之后是变成一坨还是真的可以剪成很好的碎块？

dwl1209

建议看看国外相关文献的做法

懵懂干细胞

干细胞之家有很多这方面的帖子！你自己找找

蓝O海

真皮剪了以后再用胰酶消化，看上去是一坨东西，但是只要你真的把它剪碎了的话，用培养基吹打一下他就会分开的。如果没分开那有可能就是没有剪彻底的原因。祝你实验顺利。:)

OBGYNob

回复 蓝O海 的帖子1 U0 ]. Q1 K# i+ B4 @
- c5 {+ U% K- d9 p
{:3_59:} 3Q.....

OBGYNob

宣告失败！！！！！

ziluo11

建议再查查文献，确定胰酶没有问题吧，再调整一下消化条件，比如时间什么的，不知道对不对，可以试试，祝你成功！

OBGYNob

再次尝试组织块贴壁法+胰酶消化法，结果期待中...{:3_58:}

baiyunrui

我认为你可以把胰酶换成胶原酶，你那种情况我也遇到过，最后放弃了胰酶。并且胰酶对细胞损伤较大

lh_kitty

换一把好的剪子