皮肤该怎么消化呢？？？？

bin

       小弟现在做皮肤干细胞，可是实验遇到一个意想不到的难题，无论是用胰酶还是I型胶原酶都不能很好的消化，请教各位大侠，皮肤（真皮层）该怎么消化呢？用什么酶比较好？

shy1223

我也在做原代消化，请教和ls同样的问题？希望高手指点

bin

7 v: T* X1 B2 {/ ~5 O, H$ b% {7 ]8 o+ B' p8 w
回复 shy1223 的帖子) `1 M+ h7 }. }, q" M) `( V* g

$ ^. _; R1 e  |& Z7 ^, I! s遇到相同的问题了？？？我按照Nature protocol上面的步骤不可能将皮肤消化。

痞子的烟头

消化时用胰酶0.5% EDTA，37度消化，期间多多摇晃，吹打；以前做的时候开始也是遇到消化不好的情况，嘿嘿；

sdjjfangfang

你们是否可以考虑将皮肤组织剪碎，越碎越好，之后进行贴壁，使细胞慢慢爬出来呢，我们一直是使用这种方法的，效果还不错，爬出的细胞一般都是成纤维样的细胞。我们之前也尝试过酶消化的方法，有没有获得相应的细胞。

bin

回复 sdjjfangfang 的帖子4 Z( f* G3 M  v) I* u4 A
/ c% G7 F$ L$ @) _6 ~4 p
可是我要的是悬浮生长的细胞，组织块贴壁发好像很难得到吧。

deron

正常皮肤胶原以Ⅰ型为主，此外还有25％的Ⅲ型胶原。
5 {" Y. x1 G2 C' ?" m7 B" c5 [所以理论上，楼主可以考虑下加点Ⅲ型胶原酶。

bin

回复 shy1223 的帖子- K0 {# _5 T( T0 q8 Q1 }/ l# t9 X

# R8 |/ i/ W1 ?( Q( M用0.25%的胰酶4度消化16-18小时，之后就可以在解剖镜下降表皮连毛发撕下来。

amosummer

皮肤好像是不好消化，角质比较多。可以试试加大胰酶的浓度或用量，要么增加消化的时间了。但不能太过了，免得细胞都消化死亡了，还是摸索一下吧。

OBGYNob

我也打算做这个叻，我看文献上有人说用0.25%胰酶37℃或者4℃过夜，会不会是消化时间不够呢？
) Y) q/ w" t2 A: c: Q我还没开始呢，所以也不知道是否可行，继续追踪....