提总RNA问题

pla269

在提总RNA的是时候，因为细胞不同加入trizol的量不知道如何估计，大侠们指点一下

lili_19840516

你买的哪个公司的产品，一般说明书上都有推荐浓度，我下载了一个说明书，你看一下

langziforever

建议你多加总比少加好，当然如果你们不差钱的话！我们一般用研磨法破细胞后，或者不破细胞直接加，以完全覆盖破碎物为主！因为trizol具有保护RNA的作用，加少了容易引起RNA降解，而多加无害！大不了后面抽提时多一次以去除残留！

hai1986

楼上说的对，trizol量必须足够，否则容易引起RNA降解，提取的效果很差，但多加容易浪费，trizol还是比较贵的。一般根据试剂的说明书添加就可以了，贴壁细胞按培养容器底面积加，每10cm2加1ml trizol，悬浮细胞离心收集后每5-10 × 106加1ml trizol。

mayansen1314

我们实验室用的是Takara的trizol，每5*106个细胞用量1ml，亲手做过，效果可以，个人感觉没有必要那么较真，量充足就好

pla269

如果细胞大小不同，你们是根据平皿大小判断还是细胞数目判断呢

pla269

回复 langziforever 的帖子
# w6 m: ^: L: K
" r9 l8 G  P+ a: C+ |% R) J; e* D* f你多加了trizol，那后续其他试剂也按比例增加吗

shuanger

回复 pla269 的帖子2 }2 Q" @3 T1 U2 b0 [

; w4 o- `  H. l1 D2 X* X" s7 y当然！后面要加的氯仿的体积一般为trizol的1/5，体积小了的话会影响上清的量，进而影响你的RNA的产量。

langziforever

回复 pla269 的帖子1 ~- H! ]) \$ V
" S% _* D$ @' K. }% V0 y! D
那倒不用，因为你多加了trizol，后面的液体总体积就增多了，但是你后续操作是要分成小的epp管中进行的，所以，没管还是按照那个比例加就可以了，只是分的管数要多一些！

huangcong1988

trizol一般两到三ml就行了，多了比较费钱，而且提RNA的时候，磨样最好不要磨太多，绿豆粒大就行了，因为加入trizol有限，样太多了，对RNA酶抑制效果就没那么好了，而且磨样其实挺辛苦的，所以磨绿豆粒大就行了，trizol2-3ml就够了