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6 X' P" y" p; b* w, ]/ j5 `5 c. a目录: ' I* M g4 `+ \5 B& k
一、体外培养的概念
3 s' G' x L% t二、体外培养技术的发展历史
: }* N7 W- h/ K1 p# C5 |(一)体外培养技术的创立
& A* Z8 M( b6 F9 }6 c0 t0 a- h(二)体外培养技术的发展
, J" b8 h" F M' ]3 @9 |' i" F(三)我国体外培养工作的发展情况) J: B3 u/ v5 y$ C9 O! p. {
三、体外培养技术的主要类别9 K% _; Y5 G; e% y9 B' b
四、体外培养技术的应用6 s4 o) p8 G' u" G- q% }0 y- i- d& ]: L
(一)在组织学与胚胎学以及细胞生物学领域的应用
3 i+ V3 s& t! a+ M(二)在肿瘤学方面的应用
& K$ I* I" m- Q1 e% I9 u) F(三)在微生物学领域的应用; j$ E; [( k+ s, E( ~
(四)在免疫学方面的应用6 U7 f. D2 q! j& a& O
(五)在药理学领域的应用
/ ]. ^ `+ t5 r; L1 b5 J(六)动物细胞与微生物大规模培养技术在生产实践上的应用
) o: [ G% i$ `% S7 J(七)在现代医学领域的应用0 f+ [7 X/ C- ^
(八)植物组织细胞培养技术的应用
) O: _1 {" o: X/ o# R$ S+ ^6 c; g五、对体外培养技术的评价
6 K2 g" [6 `' @% {7 |第一部分体外培养的基本原理与技术
' i( Y' N: i% G7 b4 |0 A第一章从体内生存环境到体外生长条件
% ?: s* ]4 M! H, F( T6 I第一节体内细胞生存的营养条件
- T; m) ]! q& X/ Z5 w; p! s8 x+ a一、水 u8 F7 X1 K" A$ p- {9 H$ E
二、无机盐类
8 n' c9 T1 I- W1 m' ?三、葡萄糖
5 }8 O% Q4 T: ?# Q- M0 S# H四、维生素, O. r o# f9 O/ h, U
五、氨基酸
: c: u3 d' v5 c0 j4 v& G8 W第二节体内细胞生存的其它条件
) u* J+ A m# v0 U7 z一、温度
' @0 x! K, z4 K" v, a二、氧和酸碱度+ _5 t8 H! Y9 ?, Y: M+ W u0 ]1 ?
三、体液渗透压* z5 y' p+ u% B& a" Q l
四、细胞之间的相互联系* w4 |) ~4 z" G a9 U/ ~- ~
第三节体外生长大环境
; a ]: W( Z, k+ v, q0 j9 l一、体外培养实验室6 V" z* r5 S0 P: M+ u5 C
二、体外培养的设备和器具& @' W3 d |7 r( K: F
(一)大型设备和仪器 y" q( n/ |3 a+ A' L
(二)培养器具# I7 t! H7 u- H% |
第四节培养用液+ S( [7 Y/ L4 d$ J9 y! {5 x
一、水与平衡盐溶液
% \5 B: h) j- ~+ N X0 l: q(一)水与缓冲液
- ?- K6 S p* h$ H: c* C3 J(二)生理盐水与平衡盐溶液
* g& ^- P4 m+ z, \二、培养液
& p0 _6 ]* n7 \7 Q( e `: c4 R(一)天然培养基
9 ~$ n7 O c$ y8 {" f4 N) N1 N(二)合成培养基# b; X# G4 F' ^0 }: w
(三)无血清培养基
: ]; `& p* t, Y/ F7 Z; Y, j3 A三、体外培养的其它常用液
0 d# R( ?$ _1 }' f# v6 @+ ~(一)其它常用液的类型
# G; M6 ~% x9 g+ W u9 F8 V(二)其它常用液的配制6 V% d$ _! `* ~- _- z. x
第五节细胞在体外生长的其它条件
7 X) p# `" T9 u; ~! c一、无污染的气、液相环境
! `% [3 [9 y8 \! i3 i二、温度! L$ r! o; j( L5 k& M
三、生长基质3 ], C4 c2 a6 P% T
第六节清洗和消毒, M, c* w+ }- u! q; D6 j
一、培养用具的清洗3 i5 E0 C# c; i* ]( t
(一)玻璃器皿的清洗+ l& x3 X( H. p, w, W
(二)胶塞和塑料用品的清洗 r# l! V* _: y
(三)清洗后物品的包装' @* X6 A/ V: L6 E' U- ~8 g* k; |5 G
二、培养用品的消毒和灭菌
I8 W e2 D! H* C5 X+ y7 g(一)物理方法
; T- ^0 D1 n& t% R( q' o(二)化学方法消毒8 Q O' ?( K1 ? z& e$ L
第二章体外培养的基本方法和过程% w; r0 \3 x/ w# N5 C! `
第一节原代培养
2 U0 l( ^: N+ g- @& _# E8 c# p一、原代培养的过程8 ^7 P4 S# O1 t! y/ }' c
(一)取材及培养材料的制备
% J6 j$ _6 x. a(二)分离(散)细胞的方法) e3 j# _, y& o# s9 A) {
(三)接种与培养过程2 U/ z5 B4 q+ ~ ?
(四)更换培养液7 g0 k2 n7 \8 q0 b" [+ _
二、原代细胞培养方法的注意事项) i) E3 m5 _1 j- e8 b
第二节继代培养- F0 {! N1 s }
一、原代培养物需要传代的指标
6 x9 _; ~" ]' K: d5 J. G% ~二、传代的过程: N; M' H& X# x( I; [; l4 T
三、传代培养的注意事项
/ v" ]3 R, l# F+ S, C' |第三节体外培养的基本方法和技术: j* z/ Z; z! N- \1 J
一、悬滴培养法
& l# t& p9 x) k7 l, Z(一)Maximow双盖片悬滴培养法
+ E7 J# H4 Y3 M" g& `9 y N% X(二)改良的植块悬滴培养法9 V1 l/ \0 j5 T& r t9 N) R" s1 Q8 h
二、培养瓶培养法
" N$ b8 ~, j7 M0 ?0 q; `; }三、盖玻片培养法
* A+ L+ I- w- s2 i( \! s% M四、旋转管培养法
0 g) I9 y6 t& x- k- _# V五、灌注小室培养法0 A9 j/ t, m8 ]3 m3 t5 r
六、培养板培养法( F4 H) u/ l0 P. E& ]. B$ v
七、二倍体细胞培养法2 s$ t. `. q* b, n- {
八、克隆培养法/ q4 V3 b0 n# O2 B
九、中空纤维细胞培养技术
% ^0 K" O6 h6 m& _0 [/ V5 _9 A& K十、微载体细胞培养法* U T; L5 W7 T- P( j1 i
十一、微囊培养技术
6 y5 s6 q# d" v% R第四节培养物的冻存与复苏3 F8 o6 s6 H: U$ S
一、培养物的冷冻保存与复苏原理0 a: a! b0 P6 Q" a# P* D6 p$ M
(一)冷冻速率
3 o3 |: t; s1 g% Z! [6 }(二)冷冻保存温度" N6 S/ ?: k3 i) m0 h
(三)复温速率; o& w' ~* O( W- Q
(四)冷冻保护剂
6 t: w, k2 W& Y5 S二、冷冻保存方法
3 v8 \, _8 o8 B# j) u(一)非玻璃化冻存方法( H" n( b. L. `& d% L5 B: ]. ?
(二)玻璃化冻存方法
+ f! g$ f: v3 {2 i2 \! X三、冻存细胞的复苏
& z7 R. ?! ^0 q& O: z(一)非玻璃化冻存细胞的复苏方法3 [$ @: k% x+ `: p) o
(二)玻璃化冻存细胞的复苏方法
) |0 E+ N8 Z3 M* m第五节培养物的污染8 D6 {- o% @; {" a5 T
一、微生物污染的判断+ V* L# T) t1 u1 d
(一)细菌的污染及其判断
& I% _0 N) Q2 w* Y% W(二)真菌的污染及其判断: F* t' s8 W! v
(三)支原体的污染及其判断
4 g5 ]- v7 _$ R& q(四)病毒的污染及其判断
% B# [" Q# c8 h5 m. p二、污染的预防3 l! A3 b# A. X
三、污染的排除
2 L; `/ x# K. ^9 L第三章体外培养物的生长生物学
" e1 Z" S* u$ P' ~" T$ t2 M0 p第一节体外细胞培养物的生长类型* h5 e" ^. Z q: v$ F
一、黏附型细胞 O& ]4 J, ]8 Q
(一)上皮型细胞" q5 y% `2 X6 e: e; @) J
(二)成纤维细胞型细胞
9 I$ i$ s4 }: Z(三)游走型细胞* {9 }3 e* \/ Q. X; ?- J
(四)多形型细胞( o( h9 Y' e/ V
二、悬浮型细胞
3 E+ r! N I1 o# x+ R第二节体外培养物的细胞生物学特点* ]7 k- N, I6 k! v$ u
一、培养细胞分化状态的变化
5 R6 r! p( @9 G- F二、培养细胞的增殖能力
8 e$ V: W- ?" J+ K8 C( G n三、体外培养细胞的生长过程
6 u, O; O9 h, ]& Y5 k# ^) W(一)原代培养期. W7 s" F* r/ p( d+ Z1 T% m, t: v
(二)传代培养期
( J- ?" [* G1 b9 q# T2 q8 K(三)衰退期
0 ?( x4 g9 N* h. ?四、体外培养细胞的形态学1 \2 l7 t! _! h, B$ B' o
五、植块培养物的生长生物学
9 a, v& C$ m3 n& O, | [# w+ U) `第三节影响动物细胞体外生长的因素" h" `6 e0 h! |" P) a2 D/ E
一、营养成分与生长基质成分对细胞生长的影响
2 u8 k2 U+ c' x. @% H1 v' b. V( V1 ~(一)血清的成分与作用
: I& D% F) \6 Q" f# P- c2 J( a/ C& Z(二)无血清培养液的设计及应用( ^# F* l/ a' g
(三)生长基质成分- f: t& d6 ~3 u* ^5 |+ c) A
二、温度条件对细胞生长的影响7 G) r% }+ j" m2 U6 d6 B
三、气相环境对细胞生长的影响! C. \- X- }' J% @5 }; Z
四、培养液的酸碱度对细胞生长的影响3 R7 M! L& a. u
五、辐射线对细胞生长的影响
) z+ [; d0 a1 d) D; f) Z六、超声波对细胞生长的影响6 f, {6 | ]2 _* k$ `% y3 x3 b! |
七、影响细胞生长的其它因素2 ?/ s; @; x# F& V
第四章细胞分离与纯化
/ I( C% p8 l1 D5 V第一节解离(散)组织制备细胞悬液过程中的细胞分离
7 {, e3 E6 C+ u' U( b# v第二节利用细胞体积和密度进行分离纯化的方法/ Q* o1 M3 z* F3 l/ e9 r
一、一步密度梯度离心法
4 f' ^ t- `7 r p5 w(一)血细胞的分离
: I+ |+ o& X7 }" I# `) _5 E9 y+ U(二)玫瑰花环细胞的分离
: r! [* K( G7 p7 y5 B! {% ~. D二、等密度梯度离心法- K2 J/ |6 t5 \2 a7 A6 z3 O
(一)连续BSA密度梯度离心法
2 S( ]# Y- Q; Q1 d8 X(二)非连续BSA密度梯度离心法8 B4 a2 n4 o( d6 {7 ?# K6 e
(三)连续Percoll密度梯度离心法* U3 W3 `8 `. O% M/ f
(四)非连续Percoll密度梯度离心法! v6 `$ y v ?9 e3 z
三、速度沉降法0 w" [! d+ r8 d0 E J# ^6 s7 H. @
(一)低速离心速度沉降法& T9 C( z- Q8 {. v$ B- W J8 q
(二)简单策略沉降法
& h0 {4 @" E& g. W5 W" J(三)简单重力沉降法分离白细胞与红细胞4 E/ ] ] y: p ?
(四)简单重力沉降法分离粒细胞* W; t& Q! o7 @ n
四、离心淘析分离技术% | X- R6 S4 Y/ d, p! \' Z& {
第三节根据细胞表面电荷的细胞分离方法6 v; D6 v: N) \: O o% y
一、自由流动电泳分离技术
5 x m& ?- U( V5 d6 o( _二、密度梯度电泳分离技术
5 v& _0 f( G0 N7 y第四节基于不同黏附特性的细胞分离方法
$ I2 r8 I0 K4 |0 Y. ^, A" q一、差速黏附处理
8 s$ m+ }" ? h2 s5 M二、葡聚糖凝胶G10过柱法
0 z4 }) C! \1 A7 k8 U三、羰基铁粉法2 ^: l- E+ S; K9 b1 N
四、尼龙毛分离法( ^0 f( A9 `( B9 r
第五节利用细胞表面标志分离纯化细胞的方法
- q2 K2 S/ V. L! e. i一、免疫溶解法. Z! Y" `6 U8 O
二、盘化法
5 b0 J5 C* x1 n4 o0 m" Z% }(一)直接法5 ^: G2 Q* b t5 s* U1 ]
(二)间接法
& O R: [1 F6 w) g& }: C0 P三、凝集素凝集法
' h# p6 E }, |6 D- ?$ j(一)花生凝集素凝集法分离皮、髓质胸腺细胞1 O+ ]( i, q" c/ N
(二)大豆凝集素凝集法分离T、B淋巴细胞8 t% m& n2 G" O. J
四、玫瑰花环分离法5 ?2 }) q3 i& F+ o1 Q5 w
(一)E玫瑰花环分离法
: y5 e/ }* f3 Q+ A& ~8 u9 T(二)EA玫瑰花环分离法
0 S) i/ _. [: s" ~7 x$ j(三)EAC玫瑰花环分离法" C, H, j/ `: ] }# m; ~
五、流式细胞分选术
# D8 D/ t! f9 b0 B; V) I(一)流式细胞仪的结构和工作原理
! a. N! N: R2 d, ]9 m5 T(二)流式细胞术分选细胞# F2 o& j. S, S$ Y* g! Q. T
六、免疫磁珠分离技术) i- q3 A+ M6 F' `' A
第六节利用其它细胞学特性分离纯化细胞的方法
/ j6 X6 y: N1 I, e8 ^( X一、反复植块法6 d7 Q4 V. C2 a1 o( x. p7 @
二、有丝分裂抑制剂处理
. u0 w3 G- d6 Y, G5 k第五章细胞系(株)、细胞克隆与细胞周期同步化2 l0 K( @' d+ ^& g$ m) \
第一节细胞系(株)的建立与鉴定
4 {/ s+ }9 \. U. `7 E0 v: S6 ]% R% p' h) D一、基本概念
/ |! U5 ^, G9 j& R- A0 n8 ]( H/ S二、建立细胞系(株)的档案; J' {% W1 h9 T9 X( i" \
三、细胞系的鉴定( Z; v( A0 J6 Q
(一)细胞系鉴定的内容
2 V; V! Z7 R. R# f% ~# A' l3 K# a/ d(二)细胞系形态学的鉴定方法$ ~' p8 I- ]0 o" @1 C1 G5 X
(三)细胞系的染色体数目、核型及其带谱分析3 a9 X' o9 l# F
(四)细胞系的同工酶酶谱检测
- b1 `4 o% @; C( @0 m9 l: e四、细胞系(株)的保藏# h6 y1 I, Q- p2 X
五、国内部分已建立的细胞系或株名录6 Y% E' {1 ^7 Q' f# I3 [
六、国内部分已建立的单克隆抗体杂交瘤系或株名录
/ Q+ a. r" I3 N七、国外部分已建立的细胞系或株名录
2 V7 `* \* h' w$ q- X" Y第二节细胞克隆
8 Z# u7 E& T+ r0 w$ P5 E一、克隆培养技术* h! |$ R% p8 }3 [2 m
(一)稀释铺板法% t- @6 \0 I! `1 `4 q8 l
(二)饲养层克隆法
! S; k( R* A* ~(三)胶原膜板或血纤维蛋白膜层板克隆法
5 l! _( K1 \- ]$ H4 R. [4 s(四)琼脂克隆法 o% L& B( o, x/ h. E1 Z
(五)在琼脂基底上用甲基纤维素克隆化
, r) b1 K4 ?1 S- Z G2 y二、影响克隆形成率的因素
$ l) ?0 b" M* a7 l三、克隆的分离* `( a! R( i ?) w" Z4 D9 ?
第三节细胞周期与细胞同步化4 k4 \" ~ y" G/ {' x7 ^9 p
一、细胞周期, f$ l! G6 T% F" N: e7 j7 r
二、细胞同步化) ?7 \6 I, f1 [& _ r* [: k
(一)各期细胞的分离- }2 L2 i$ x6 \; X' p, P1 w, L
(二)细胞分裂相同步化法 H1 S/ |/ j# v
第六章器官培养1 o* N6 H, v6 w- M% @7 O4 s) t
第一节器官培养技术概论7 P; D, Z, ~2 C
一、器官培养技术的基本要点
( v) b ?0 u3 M2 ~" g- _3 l7 Q二、器官培养技术的发展简史
: x+ G- ?/ K& f三、器官培养的基本原则5 T/ c$ V- q* q$ _
(一)养分的供应与取材# t3 I7 F7 l& x; q9 m# a) k8 L: x
(二)抑制细胞迁移0 Y! U# x+ `# ?1 F' p2 b
四、对器官培养技术的评价
* m7 p; I8 s% ]五、培养器官的生存环境及影响因素
3 A/ y9 P! Z W$ B/ X& c* B(一)培养器官的生存条件及其影响& Z0 j9 I' v* i% w8 d- E
(二)培养器官的内在因素及其影响- i s! j3 Z) b2 V6 |
第二节器官培养的基本方法0 W* X' u2 l) W' {
一、表玻璃器官培养法
$ E5 U6 F+ a$ B& F二、琼脂凝胶培养法(Wolff器官培养法)* s6 t2 Q) }7 r3 ]6 }; @$ T
三、悬浮培养法
6 w; V- u4 \2 v2 H# e四、直接漂浮培养法% `' u- F6 j0 L$ h5 s
五、擦镜纸培养法8 p# Z; v3 M( _+ ~) c5 L6 M
六、金属格栅器官培养法
; a5 H& e3 G& {$ O1 N" H& N七、琼脂小岛器官培养法
, n) T7 m2 m. p) ^1 I* n R八、陈氏滤纸虹吸器官培养法6 K8 K& s1 R I/ a. d% C, H
九、灌注式器官培养法
$ e' a* ~3 `& b+ |十、旋转管培养法0 ]" B3 O. S% P
十一、摇摆式器官培养法
6 {0 [( }6 ?& d3 b; U" Y, R2 }, o十二、器官灌注系统2 N& ] b. q( g {1 Z
十三、鸡胚尿囊绒膜培养法
8 x, U$ ~: o- s! R+ Y! b十四、早期鸡胚胚盘培养法& G, g# G" x" X* S% i
第三节器官培养各论3 h7 Y6 Y s: a2 _& n5 M- Z5 l: h
一、胚胎肢芽的器官培养( B Q# a/ L- Z/ ]! v( N
(一)胚胎肢芽的血浆凝块器官培养方法( d7 v9 A: Q/ X
(二)胚胎肢芽的琼脂凝胶培养法
$ f5 L4 I- R- o+ k' W二、胚胎性腺的器官培养' ~3 V# q% v2 A% ]7 e5 K) G
三、软骨与骨的器官培养
5 l! r; M2 }& g) f/ {(一)软骨的器官培养# ~( ~, I9 d- P4 x/ x2 s
(二)骨的器官培养
9 Y3 S& }% @7 Z/ ^. F四、神经组织的器官培养- M5 |4 s ?3 r+ S( g& o* Q2 K
五、牙胚的器官培养% _9 F: ^& G' \! R: r
(一)Trowell培养法培养牙胚器官9 y* Y# ~' R& K# U, X
(二)悬浮培养法培养牙胚器官1 e/ G* E5 ?% }) {6 }
六、腭板的器官培养 a$ G4 E7 z5 D, ?# P
(一)腭板器官的静式培养法( e5 b- e" \, S1 U6 A
(二)腭板器官的转动培养法4 S5 t* a3 Y0 O% y; {! Q2 j
七、毛囊的器官培养
$ B$ { p3 l, ^* s2 A, b八、血管的器官培养
% j1 S% f+ v( C1 m; n4 t1 q4 O2 Q(一)血管的悬浮孵育法器官培养
' B: ]; r) u, T' b! F4 W(二)血管的琼脂孔器官培养法
s5 e3 S# A' V3 t1 X5 m九、肝脏的器官培养
% p6 Z* G) n1 b% D6 z: Q/ ~) d十、小梁网的器官培养
* F Z' k* h1 v7 e* ]0 x* @9 y" M3 U. q十一、人胃肠黏膜的器官培养7 b5 @6 z3 t, _- s
十二、胚胎器官的上皮与间充质植块的联合培养
3 c P. O$ Q/ V6 V十三、肿瘤侵袭研究中的器官培养, ]; Q& X" R6 g8 z
(一)肿瘤细胞与靶器官植块的制备( R6 R. q+ H# R4 q- u2 E/ N
(二)肿瘤细胞与器官植块几种联合培养模型
9 o- b2 O* m% O8 z& E5 t第四节全胚胎培养+ g/ ^& ]& f E) d
一、植入前胚胎培养
) Y# j' h0 ?; O) L9 N* D二、植入后胚胎培养
8 M3 T9 a7 L# b" o8 G* R第五节器官培养的应用
2 I/ ^, { a2 _一、器官培养中的形态发生研究
, D9 F, t# ]3 v; ?4 p9 h二、器官培养与发育分化研究4 p% L+ G( V8 C
(一)外分泌腺的发育分化
$ x9 @" K" P. E/ A) e9 m, v(二)内分泌腺的发育分化. |, V0 U$ \. B& J3 b) S5 C O) f8 m
(三)性腺及前列腺的发育分化& L/ k0 k) h6 n, f$ i9 S, x% |6 j' o
(四)神经组织的发育分化
x0 r" h. P. s$ Y6 V' W(五)各组织细胞间的相互作用对器官分化的影响
) D V# Y: j; i" F! p三、体外培养整个胚胎的生长发育
" ^4 z% v6 C& Q" G2 D% E; E四、胚胎致畸作用研究
9 F. I) w) P9 U五、器官的功能及其代谢研究
6 s/ B( S5 p/ B3 E8 l8 D六、器官移植中的应用
7 k$ f2 f! \+ L, \! H(一)器官保存
/ c2 l. A" Z5 P7 o3 p% J2 ^7 B(二)降低免疫原性3 _4 X% @! e, D+ g, F
七、器官培养与肿瘤侵袭研究$ H- K0 m& _1 \; |& R
第七章培养物的观察检测方法
: w; k; G/ P- Y$ w" r第一节活细胞的观察检测方法
( K) Q" H6 X; N一、相差显微镜观察培养物的形态结构
2 n- j3 ?" e! B5 u, u4 Z5 C(一)相差显微镜7 G+ J+ ~( T$ T- J# I4 G, W1 Q
(二)用相差显微镜观察活细胞的方法
1 O+ e# O% h; N(三)活细胞的动态观察与缩时电影
; X' x- x; B4 j9 r' J; e8 ^二、细胞计数法
0 _" X" R! ?9 S' f( O8 D三、细胞生长曲线, Z" O4 Q6 {" K% V f# c
四、体外活体染色观察与活体染料
8 C0 s6 h4 Z, a) }1 S: B6 m, s五、活细胞的染料排除检测法% o7 T/ }# v: _! n
六、细胞增殖活性测定的3HTdR掺入法/ [: R4 O; [, D2 [* Y- v
七、细胞活力测定的MTT比色法
. W! O$ @: ?2 {. i第二节普通染色观察
% q* J% _! d+ ]# i一、HE染色法
" v. H$ d# \5 U( [, Q二、吉姆萨染色法
O4 V8 Z; z! w; g三、载坡片处理方法
R( Q- O4 r) s- M. [第三节细胞化学技术: |! Q/ u$ b P0 F3 @7 a
一、酸性磷酸酶* P* [" _4 T8 l# z" G* M
二、葡萄糖6磷酸酶
, Q) y) h# Y \) R" U三、琥珀酸脱氢酶7 d* \* N% N% Q9 R5 J, e E
四、DNA与RNA的吖啶橙荧光染色法4 } L: [1 F p# E* v: g+ C; o A
五、DNA的富尔根(Feulgen)染色法
2 Y1 k% ^9 ~ W* }第四节免疫细胞化学技术& e; \$ I5 x. Q5 e1 u
一、常用免疫细胞化学技术原理
2 h) o! j: z8 t x2 s2 |3 L# K二、常用的显色标记物
, u) g9 T! ]) [, P2 k+ a, u(一)辣根过氧化物酶
+ `# j! P# {8 Z2 C; p(二)碱性磷酸酶* _6 k8 i6 V& d7 a7 }; ]
(三)荧光素
9 m8 i! m0 N5 t(四)胶体金与免疫金银技术
) Y: P j' b! i, y三、免疫细胞化学方法及标记物的选择% y; s# V5 {. B) D9 C! A# e
四、免疫细胞化学的一般问题! K6 `( G. n/ j& n- [
五、免疫细胞化学染色的典型程序
# ^) G* k7 w7 L, b7 l(一)免疫酶间接法
) m0 J/ m: d; b0 c' Z% a4 T(二)免疫荧光LSAB法
6 v3 ^* D I" `; R4 o(三)PAP法
" D' J+ x' N' A2 c; X(四)SPA胶体金银法1 h7 Y7 F1 M7 z( A& F
第五节原位杂交技术3 l( j- @& m8 P5 j1 F
一、探针与标记物的选择: I& U( s' @4 u# b7 S
二、原位杂交技术主要实验材料
3 g, d( K& _8 p: o, _: e三、杂交# j: D+ @) M2 J) }6 i
四、显示标记物
! }+ w7 t- j1 Y( Y: F五、设立对照
8 r5 G0 v) t' ]2 X8 ]+ b第六节电子显微镜技术- w+ e: X4 ?: p* R3 T
一、超薄切片技术8 V6 c- y' i3 ]: T2 D* {- F- } O
(一)对培养物的预处理
9 U# Y: n, y- x" C" `5 J8 [, n(二)标本制备
) }# V! M C% z. x3 a; p! r二、电镜免疫细胞化学技术& N1 Y0 f7 w& {
(一)显示细胞表面抗原: O0 C6 l2 {: y4 t* o) l
(二)显示细胞内抗原
2 u+ ]9 B( B2 }; L) ]三、其它电镜技术简介
2 p! h/ p! N3 l3 P( |(一)扫描电镜技术7 n. w3 `0 g8 H' x$ E
(二)冷冻蚀刻复型技术, H( O7 o& w! x$ x; Q+ D
第二部分动物基本组织的体外培养
' W4 _, C$ [! f8 v# o第八章上皮组织的体外培养1 G& M" p* o8 n- H* m, z8 d
第一节上皮组织体外培养技术概论
$ U0 A; _* h: _2 K2 M: }& o一、在体生长与体外培养的上皮组织的基本特点9 W+ p9 S, P: W# ~+ A! B
(一)上皮组织的形态结构
1 k" R5 Z Q# @1 H# M(二)上皮细胞的极性1 k3 q6 O) p9 p
(三)上皮细胞间的连接7 R7 x7 B+ \2 i; V
二、体外培养的上皮组织细胞的生长生物学7 X0 w4 h7 h7 o/ R8 f
(一)体外培养上皮细胞的形态结构. P4 i$ P- ]9 X" ~
(二)体外培养上皮组织的生长与增殖特征
% N x5 A: z8 p" l; C! ~三、体外培养上皮组织细胞的观察与检测! A6 p. s2 D& H8 R
(一)一般形态学观察% Z8 X, r! @, t( d. K0 D) z
(二)组织化学与免疫组织化学观察与检测7 ?! m: Z5 e: M( @
第二节呼吸系统有关的上皮细胞培养
4 h) L) k+ h4 f b9 I, r6 W o一、呼吸道导气部上皮细胞的体外培养) s: ?7 k, w" w R4 \' f3 n
二、呼吸道导气部上皮分泌细胞的悬浮培养$ P9 f( w4 Q7 r$ r9 m- u) m
三、Ⅱ型肺泡细胞的培养; n; ~6 a4 E- [& O, | h, H6 y
四、鼻咽上皮细胞的体外培养8 Q( H- k) a% x1 r
第三节消化系统有关的上皮细胞培养
8 K6 x/ J7 Z1 _, k一、食管黏膜上皮细胞的培养 J% V2 S/ C2 R, ]8 O: Z
二、胃黏膜上皮细胞的培养 Z+ s: }0 O, Y6 p* v# e
三、肠黏膜上皮细胞的培养
2 q& c9 E8 B4 b2 T4 O四、胆囊和肝外胆管上皮细胞的培养
! W/ f/ C" a Q' J8 s# \5 F第四节腺上皮细胞的体外培养 p$ T3 [) {& J; S" ^2 L
一、唾液腺上皮细胞的培养9 e1 T6 u/ Q0 u7 I3 q$ k* o! z+ H. V
二、乳腺上皮细胞的培养
' C' {6 T- a0 E l* ?(一)乳腺上皮细胞原代培养的建立和维持
^+ ^5 X! Z1 c" `6 N(二)乳腺上皮细胞的悬浮培养
( W1 y" n5 `& O/ O. I$ r(三)乳腺上皮细胞在EHS基质上的培养2 F$ `# t6 P/ d R, Z
(四)乳腺上皮细胞的其它培养方法- M& x; x9 c% M* u
(五)乳腺上皮细胞培养中的有关问题
) i; e; L7 H0 u3 N: L$ d) l第五节表皮细胞的体外培养9 K3 i. f' r% ^! o4 K
一、表皮角质形成细胞的饲养层细胞培养法5 s' `* w5 g) I# J
二、角质形成细胞的复合培养法
$ ]/ N6 }; _( T4 P d+ P) Y(一)在人去表皮真皮上培养角质形成细胞
% |9 o; Z3 z9 L/ d N" G5 H(二)在真皮替代物上培养角质形成细胞2 `/ S9 a6 ~" y" s) m
三、表皮黑(色)素细胞的培养, g& w! [. y- t( q5 ?
四、表皮郎格汉斯细胞的培养
# {! ^; l0 Z$ z) S2 j6 X第六节血管内皮细胞的体外培养
& n9 j8 s) N" o1 v! F! j一、猪主动脉内皮细胞的培养
% H- }- Q# m' `9 Y$ V B- [8 _4 h9 @二、免主动脉内皮细胞的体外培养9 L' d$ |/ ?7 j8 s$ z
三、人脐静脉内皮细胞的培养- y* e3 o" m: x1 W* ^
四、大鼠主动脉内皮细胞的培养
: q$ R. X! g/ C五、滤膜培养法培养血管内皮细胞
m2 k9 k7 ~; H6 z六、免脑微血管内皮细胞培养
& g9 Z& ]3 n6 I+ C; x- g$ b% O七、大鼠肺微血管内皮细胞的培养
; S/ V2 J$ }8 ]9 u6 u第七节胸腺上皮细胞的体外培养' x6 \) Q6 Z2 l1 B! B6 e
第九章结缔组织的体外培养
. Z2 b1 R9 Z) S/ @* W1 z第一节结缔组织细胞的生长生物学特点与基本分离技术
% Y. G' g' a( F一、结缔组织细胞的生长生物学特点% d1 b- E2 L O8 f
二、体外培养结缔组织细胞的基本分离技术
- K T7 B6 U, A3 V% K第二节结缔组织细胞培养各论
: l5 w" H/ r3 [% a: t一、成纤维细胞的体外培养7 V! ^8 o/ Z0 ]6 `2 M8 }
(一)真皮成纤维细胞的体外培养6 Z6 O' T6 v! M4 ~% w& C
(二)人包皮成纤维细胞的无血清培养* V. _8 T9 w$ D" P( y% d' i8 d7 l
(三)中国仓鼠胚胎成纤维细胞的体外培养
. z9 I( O/ k" [: y3 G(四)鸡胚成纤维细胞的体外培养
, _9 W3 ] H# [* n, x q& L(五)人胚肺成纤维细胞的体外培养: f) G% m' N; I3 k$ y
(六)小鼠肾间质成纤维细胞的体外培养
) d) P: e- b" k- N( J0 }; @1 \, W(七)眼组织成纤维细胞的体外培养
2 k0 ?9 m7 S; N6 K二、巨噬细胞的体外培养
. \7 d! R" O0 ^# w. w' |% N(一)获取肺泡巨噬细胞的方法
- r# B5 c5 T. T(二)获取腹腔巨噬细胞的方法; Z, h; x% I9 ?* B
(三)巨噬细胞的纯化
+ c& w0 C% e, k& n/ _) e(四)巨噬细胞的接种和培养) t5 R$ R& \8 v. r# I3 f
三、脂肪细胞的体外培养+ _- M; B) {7 D3 y
(一)大鼠前脂肪细胞的原代培养8 L; v! G0 J. `7 q5 k- L8 l
(二)小鼠前脂肪细胞的原代培养
* z3 }1 S) t8 n. d) t( o h Y3 y四、肥大细胞的体外培养
7 G3 i3 F6 ]6 i( V; }$ ~(一)肺肥大细胞的体外培养
. C, Y1 Y! ]' Z; I(二)肠肥大细胞的体外培养! U' z4 y( q0 n0 i9 f7 a/ u
(三)皮肤肥大细胞的分离和短期培养7 b8 E# O8 M! O1 E& U: N: A' A) d
五、间充质干细胞的体外培养
. H4 w/ ~; T4 `( K(一)鸡胚肢芽间充质干细胞的体外培养+ K1 a3 O' Y# f0 {3 U/ Z7 j
(二)大鼠骨髓间充质干细胞的体外培养
9 i0 T2 \+ |* A/ O# X(三)人骨髓间充质干细胞的体外培养
9 k& T2 E& }6 w2 G8 x(四)兔骨髓间充质前体细胞的体外成软骨培养! W6 `2 C9 W5 q1 x. q1 Z
第十章几种重要脏器细胞与特殊动物细胞的体外培养
- C: `% U7 \' m' x) Y" l第一节眼组织细胞的体外培养# y. R7 |# d: J3 C! x; E1 s% t
一、角膜上皮细胞和内皮细胞的体外培养
6 U$ K% r6 l; A' C* @, H(一)角膜上皮细胞的培养
+ h! l9 ?5 D* h$ ?) P(二)角膜内皮细胞的培养1 [, x: A' J" ^# Z' o; r# d; \
二、小梁细胞的体外培养
6 L" f9 {( ^$ ?" {% v$ J三、视网膜色素上皮细胞的体外培养
- E/ R0 Y% C8 R+ T8 L四、晶状体上皮细胞的体外培养5 a0 ^1 p; u2 x; s
五、视网膜米勒细胞的体外培养
! L4 m( i* o# B+ |' ^8 m4 }第二节骨与软骨组织的体外培养- g; n( z$ x" I6 d! e) l. r
一、成骨细胞的培养
: z( V/ Y" p* L: J2 \(一)骨内成骨细胞的培养
8 e4 E; u1 A6 \/ n(二)骨膜内成骨细胞培养
; s3 r3 a6 B7 q二、破骨细胞的培养( v9 M. }5 M- @9 t( M: @
(一)成熟破骨细胞分离细胞培养法
/ o- l9 O" d3 G3 ]3 G) m4 G7 q: I(二)骨髓长时间培养诱导分仑形成破骨细胞法4 p/ A9 G/ y$ D" y W
三、滑膜细胞的培养" t% F$ \8 J2 G0 d, W
(一)滑膜植块培养法( E' S/ j( c" A
(二)分离的滑膜细胞培养法
2 d+ T6 `) M- N- P- ^8 h4 Q四、软骨细胞的培养
( l0 d/ F, D" O0 @(一)关节软骨细胞的短期培养
# [, [7 r/ _! w! F* L5 q(二)人关节软骨细胞的长期培养法6 }2 p1 p! ~. h# ]. B8 M8 t) L$ [
第三节泌尿生殖系统有关的几种细胞培养9 e% a7 ^; U& U
一、生精细胞的体外培养, }! J% A ]/ |% ]/ y1 e
二、睾丸支持细胞的培养
# M/ y7 H2 y# E% q三、睾丸间质细胞的培养$ {5 a0 z7 Z, h' b
四、肾小管上皮细胞的培养
) _4 ^- x: |1 i五、肾小球系膜细胞的培养
( X2 a" E6 {& B% r第四节几种内分泌细胞的体外培养6 v- A1 x$ w6 l M4 f
一、胰岛细胞的体外培养
2 i, {( D% ]. H4 X) K二、人垂体腺瘤细胞培养
) U; E6 W+ y( K# @ ^3 m( \三、甲状腺细胞的体外培养8 o0 E& P" P8 l& f/ I% h0 Y& u
第五节羊水细胞的体外培养6 F4 @8 M( j/ T
一、羊水细胞的体外培养基本方法
6 ~5 b0 ]. G& }2 c" i# o二、羊水细胞的富集培养法
4 l# _- `5 d' D第六节胚胎干细胞的体外培养8 m; X4 O7 V4 M7 C& q' s
一、体外培养胚胎干细胞的技术原理4 D) \* u" P, n* y' Q
二、体外培养胚胎干细胞的基本过程7 a- x& x# M' W8 @- [+ V
(一)饲养层细胞的培养2 x6 j% L) q, E- Q5 o
(二)饲养单层的制备, H- L: ]# }. y5 o% E9 c
(三)用于培养胚胎干细胞的条件培养基的制备! w7 @% D, E) m/ Q6 }; h
(四)胚胎干细胞的分离与培养
* i* V1 B, {5 F2 h; e' ](五)胚胎干细胞的冻存与复苏
5 X$ f Z5 R( u$ c8 ^+ b% a三、胚胎干细胞的鉴定8 }! g0 w5 q& a. s/ u# _
(一)碱性磷酸酶检测+ `! I+ B) p0 n
(二)核型的鉴定
7 U) ?1 S( X. n) Q' g(三)体外分化能力观察" A, f% H4 v8 p
(四)体内分化能力的观察! v; W9 s! W' B3 t
(五)嵌合能力的测定
( C+ ?0 U( ~6 c) \& _1 o# i: E第十一章造血干细胞的检测与造血祖细胞的体外培养& M, p+ ]2 X9 s/ a* ~9 }, w
第一节概论9 B6 w% }# N; `$ C# [! i
一、造血干细胞的生物学特征
' l- h/ K& v" e(一)造血干细胞的基本特性6 t3 R7 H- [5 D8 ^! E8 T& d2 p
(二)对造血干细胞的识别
1 ^+ G* X. u" i$ D3 `! D! V) A(三)造血干细胞的胞龄结构* f3 g8 j* ]! E! v/ K9 {6 G
(四)造血干细胞的动力学6 j% y( u/ {9 v; y2 |
二、造血祖细胞
( f. ?5 k+ t- h) ]# Q' v9 ^; c第二节造血干细胞的测定技术
% @4 @5 W2 a+ t一、CFUS的检测技术" Y( T9 @/ g$ n2 q# e# b
二、以标记染色体测定脾结节的形成
) }; S: v3 @% N1 Z# Y! _8 m三、脾结节移植法测定脾结节CFUS
+ I: ^; F* T" b; |9 F第三节体外培养造血祖细胞的特殊实验材料
% [" e' A" G& k! ^& N! U0 Y S一、培养用液
5 j3 N* v6 t2 @二、特异性刺激因子的制备
" R- F) s# u' \6 f# P% \9 ](一)横纹肌条件培养液的制备
* f5 k$ { L @ I# ^+ C(二)白细胞条件培养液
Z* P% L }, t(三)脾细胞条件培养液
. Z3 v% r" N% J& m) J+ `7 S! S(四)再障病人血清的制备
8 f) ~: U5 [/ _' k(五)胎肝细胞裂解液的制备
4 A/ n B3 I3 T/ W第四节造血祖细胞的体外富集与培养
2 e% |% I$ v; u3 h一、造血祖细胞的富集
/ u) i' s1 _+ d9 f) x- E9 I+ O6 {(一)单个核细胞的分离
w8 O" d+ k* N5 ](二)CD34+细胞及其分离方法 m( P$ J9 O: C, b. s- D
(三)CD34+细胞的MACS免疫磁性分离方法) B4 V- l* T2 G
二、造血祖细胞的体外培养
4 P# a& q1 X8 j三、各类造血祖细胞的培养技术: w# u# Q. I \, K& f1 b
(一)CFUGM的培养
8 _4 N+ o$ \: i$ K! E(二)红系造血祖细胞的培养
5 [$ s: [4 b- E: F) B(三)巨核造血祖细胞的培养
( V' m. K M& n7 h(四)混合细胞集落的培养# ~) I$ I' M: {. L# h' F+ `, _2 e
(五)白血病细胞的培养5 Q8 h, @& M/ p/ N5 i' P+ |, j2 T) W
(六)无血细胞体内扩散匣培养技术. ]3 X' L" _7 Q; h
第五节造血祖细胞培养技术的实际应用
5 }% @, J! |( ]一、正常人骨髓内各种造血祖细胞的含量测定0 S% @) g8 S i4 W1 p9 }
二、某些血液疾病的细胞病理学
' L: `* I) f. x2 o3 [三、药物对造血细胞的作用研究3 s% F+ i( _1 K5 S. `' c
四、再生障碍性贫血的发病机制和预后以及造血干细胞移植治疗4 z9 K( a) k$ c @, ]( S
五、体外测定造血祖细胞辐射敏感性与全身放射敏感性反应的关系
% Y$ w7 j; Q7 `) J第十二章血淋巴细胞的体外培养8 d) O$ O3 r9 V, }7 N1 ?
第一节各类淋巴细胞的主要特征) P6 H# {8 t/ U
一、T淋巴细胞3 H$ X$ f& [7 O% {- `8 r
(一)T细胞的表面标志
7 x5 l7 W( i. |8 r2 Z(二)T细胞亚群及其功能& y" A" W7 d8 d# V( G
二、B淋巴细胞4 O J! X: N8 Y
(一)B细胞的表面标志 u1 m# Q- C6 R4 A* \! F( k3 `
(二)B细胞的亚群* u( z( o3 `! @
三、大颗粒淋巴细胞. L9 X+ i0 S9 s% a2 R
(一)NK细胞8 E1 X4 z+ h7 P% ^' }" b
(二)K细胞
) Y9 M# `9 _: _6 X第二节血淋巴细胞的分离
% T. v. l2 e7 w2 ]1 T8 `一、单个核细胞的分离
; l! G; G9 c" l0 X4 z, h9 H二、纯淋巴细胞的制备
- D5 x- @4 P2 ` ]& ^0 m0 O1 B(一)玻璃黏附法# D3 o. @% V) b. v3 e9 R
(二)羰基铁粉法
' K H, z: D Z/ D" x三、T细胞和B细胞的分离& H1 f; P! o+ X& _
(一)T细胞花环沉降法( ]+ j6 K( t. g7 i
(二)尼龙毛柱分离法$ ] Z; K& p2 K2 s& s+ I' C2 Z
四、大颗粒淋巴细胞的分离
5 S8 u% Z5 U" |6 ~, N; x五、荧光激活细胞分离仪分离淋巴细胞及其亚群0 S+ a1 t0 e5 ?* @
六、免疫磁珠法分离各种淋巴细胞及其亚群 G3 Z' ^/ [& e6 R( J2 J. p
第三节血淋巴细胞的体外培养方法和应用
: i) }% {2 M) d一、淋巴细胞转化试验8 N7 S+ u( e; d( ?4 Q% `
二、B细胞产生免疫球蛋白的检查
" j& B0 y) {' Q# z三、T细胞介导的细胞毒试验
; r# g5 m3 _- B, s6 Z四、NK细胞毒性试验. _# |6 }6 f1 N! e) m* }- ?
五、K细胞毒性试验 T" s2 u6 x/ ?
六、LAK细胞的制备
% z% h$ t& p4 W1 S6 ?; y7 _ ^七、淋巴细胞的体外长期培养
: w' N3 i* S, S! Y1 k+ J2 F(一)用IL2建立T淋巴细胞克隆( n% ?; W8 _* p
(二)用EB病毒转化B淋巴细胞
% A1 q: Z) q5 z9 d/ B/ o6 H: u(三)用B细胞生长因子建立B淋巴细胞株' s+ |+ F6 w* f' z: d* Z
第十三章肌肉组织的体外培养
! d5 {9 j$ E+ j ?0 a4 o- E5 j2 y第一节肌肉组织体外培养技术概论
; B) E* Z4 r& v' y5 X) O( s一、肌肉组织体外培养技术的发展简史
# J3 \5 w( P b" D+ w+ j( D二、肌肉组织细胞培养的意义与评价
. p7 W6 B: y5 c5 B; w7 x. E/ n第二节心肌细胞的体外培养
+ c9 ~/ T4 Z4 F$ o5 i一、心肌细胞培养的基本原理
1 c3 B! m+ B2 D$ K' Y二、心肌细胞培养用液: W5 s# Q" y% ^' s
(一)常用平衡盐溶液
b, D, ~$ a, P& v5 g7 D(二)心肌细胞培养液
# }" M: A Q- o2 m# }(三)其它培养用液; ?3 n" R& n% F+ M2 y
三、心肌细胞的培养方法! J8 C4 r2 Z( w& h2 I) ]2 H
(一)心肌细胞的原代培养
" D4 y; k& j% ?' M* J0 W(二)成年动物的搏动心肌细胞的制备9 w' z5 Q' `" W, u0 [* W r' j: x( |
(三)心肌细胞培养方法的某些发展+ H5 G2 w& v4 D& t- L
四、心肌细胞培养的基本结果与观测方法+ p3 d, X. n1 n3 ^8 l& s9 _- U4 @
(一)一般观察2 n5 U1 n, T7 g. I1 }
(二)培养心肌细胞的形态学观察2 }- e4 e" u% M8 H' x; }1 X! Q
(三)心肌细胞搏动的观察. T0 F; Y/ p3 h9 V2 F4 I8 Q/ a
五、培养心肌细胞的某些电生理特性% _$ R/ d5 H8 F9 \
六、培养心肌细胞代谢的某些特点- N1 N; n7 L( v# q# [
第三节平滑肌细胞的体外培养4 Q& W) {; X# s+ s4 ^8 g
一、平滑肌细胞体外培养方法* O# K A0 d0 R: {% s: {; r( N' R1 L
二、培养平滑肌细胞的结果与鉴定
2 K' @. g) x2 b4 q4 @1 t% q三、影响血管平滑肌细胞增殖的因素% b2 o8 _/ v# |. F0 c6 U: D
第四节骨骼肌细胞的体外培养
) N( M6 S7 ~& I+ ]# J5 S+ [一、骨骼肌细胞培养所需主要材料
i/ ?3 R$ P" Y' A. m! D二、骨骼肌细胞培养方法: M1 ]( e4 } d% a
(一)乌类骨骼肌细胞的培养: c B0 K5 K1 Z5 [4 U$ _
(二)啮齿类动物骨骼肌细胞原代培养方法6 ~5 @- I( m( M. b7 } l
(三)从啮齿类动物肌肉中获取高纯度肌源性细胞的新方法
% W- L7 h# n! m8 L( p) K! b三、肌源性细胞系的建立# T9 }' ~1 M h! n
第十四章神经组织的体外培养9 V# m3 W, f- ]. p2 ^: K% ~
第一节神经元的体外培养7 x: y# J$ ]! X' m# ~# v/ h
一、神经组织的植块培养法
2 A! H: s! g! A2 U1 ~+ C o1 I$ \; a(一)概述% @/ n2 o. n" \& u: l, @
(二)灰质组织或神经节的体外培养% a' U5 r' k5 o# ]* z
(三)白质植块的培养
6 w4 ?6 a# I2 _ F* I9 J二、神经元的分离细胞培养方法
2 y f( K( M. [/ T) c9 j& ]: [(一)材料的来源
" h( C, k- ?$ Y) d(二)神经元体外培养液
4 Q4 x6 M* J' \1 U# m* g(三)神经元体外培养的生长基质0 _) j4 g* H0 s: s& i
(四)神经元的分离细胞培养过程
4 S' ]) k) k: H6 t: J(五)神经元细胞的体外培养" M. J# m: h, g$ W; _* R- M& ]
第二节神经胶质细胞的体外培养/ `0 v3 r4 W" Q& E& f8 D4 A
一、星形胶质细胞的体外培养8 |# Z. r# E; v! N% }
(一)取材的动物年龄与部位
( P Y% M& ~" p& w5 \(二)星形胶质细胞的体外培养方法- ]8 _7 m1 L* w( Q) L
(三)星形胶质细胞的无血清限定性培养液
" n# I% D0 z" l9 w& y' _4 I2 T4 `(四)星形胶质细胞的形态学特征与化学标志物* M% x% q9 e x
二、少突胶质细胞的体外培养
) ~" |8 v$ d% n. T4 K4 @. F(一)体外纯化过程( T `8 t) l# w: q8 h1 F
(二)体外培养少突胶质细胞的化学限定性培养基
$ v# d) b, T6 `% o6 o+ N3 E(三)少突胶质细胞的化学标志物/ }% q& K* [) g! s- Y1 l
(四)少突胶质细胞的形态学特征; _4 I3 Y/ y8 V6 p
三、施旺细胞的体外培养
. V( b5 U6 }6 P3 ~8 d8 |(一)施旺细胞的体外培养方法, u: @- T# v5 Z
(二)施旺细胞的无血清限定性培养基
3 D% U+ i) m7 M- ^. ~(三)施旺细胞体外生长的形态学特征与化学标志物# o3 }! i X, Q# @% n
四、小胶质细胞的体外培养# [7 p s: A5 _. x+ I
(一)小胶质细胞的体外培养方法$ Z; Z7 N( i3 \5 H' Y
(二)小胶质细胞的形态学特征与鉴定! ?( S% w' j4 v" x0 X: G8 i
五、其它神经胶质细胞的体外培养0 h* Z# q( ~4 Z! `
六、体外培养神经组织分离细胞的形态学特征比较
* @! C6 o* \# p' S( ~. [# R" a第三节各类神经组织细胞的培养方法
; y( \1 H- l6 B# |3 |' f; k( U0 A一、鸡胚背根节的体外培养
3 n% f, I8 g# P二、大鼠颈上神经节的体外培养
9 n( z5 W( h" ^; A三、大鼠小脑皮质神经元的体外培养
2 G* E) ] e! R" J" j; b) Q四、大鼠星形胶质细胞的体外培养3 r( _* a# O" i! q8 {2 s
(一)方法一：植块培养法/ U+ ~! N, F- P& R% e
(二)方法一：分离细胞培养法
8 N& z# W0 E; p a/ ^6 L7 p五、大鼠少突胶质细胞的体外培养
4 |, B% e: `$ `(一)方法一：植块培养法
, L: c7 y+ d5 j, o- Y, q/ ~3 O(二)方法二：密度梯度离心法
2 u$ H" m5 M7 \0 \- @. V7 x: `% t; X(三)方法三：恒温摇床处理法9 G4 y* t& ]' O/ G1 {
六、大鼠施旺细胞的体外培养, u+ v" N3 }% R5 e. F. O$ _1 q* q
(一)方法一：常规分离细胞培养法1 |; I5 x' s% @4 c. D e7 G
(二)方法二：免疫选择法# y4 y% ] T( L# D
(三)方法三：反复植块法+ S7 y( W" `2 W& g4 H$ \9 `$ P
七、鼠脑小胶质细胞的体外培养6 b6 u" U+ a( i J8 b# x& n
八、脊髓神经元的体外培养
% Q. Y$ B6 x8 H9 l! ?) |(一)方法一：差速黏附处理富集脊髓神经元培养法
+ T; N4 n z: x3 Z(二)方法二：台面选淘富集脊髓前角运动神经元培养法% X8 n, e+ I7 R6 L% E
九、鼠脑神经干细胞的体外培养
. e( L V% M# b6 T& R(一)胚胎神经干细胞的体外培养
& [ j' ~5 ], [3 P' {$ G(二)成年脑组织内神经干细胞的体外培养
; e( ~7 r0 C; z) {十、大鼠胚胎几种常用脑区组织体外培养的取材$ S) q% Y: U$ x9 O+ o6 Z
第三部分特殊类动物细胞的体外培养
; P* I) [' `* a8 k* }8 f第十五章肿瘤细胞的体外培养. h3 s' r$ g' i. F7 g2 I5 n" m
第一节肿瘤细胞在体内和体外的生长特性概论1 J0 _5 e' p2 l$ _! g
一、肿瘤细胞在体内生长的特征. q$ p$ H9 S f$ b8 y6 b4 J% c5 E1 o* {
二、肿瘤细胞在体外的生长生物学特性
3 V; |/ S# A; \3 z4 z+ C3 Z9 o三、肿瘤细胞在体内和体外的生长特征差别
# @" [, y4 V: X. w, o+ O四、体外培养肿瘤细胞常用的培养基
4 i p2 t/ z/ F6 h* H第二节体外培养肿瘤组织细胞的方法和技术7 b; @% J; p n+ d. P1 g
一、肿瘤组织细胞的原代培养
/ C, s( B- V- T5 w* {' F [) w' G l二、肿瘤细胞的传代
7 q5 d. I/ T0 z5 A0 H三、肿瘤细胞的克隆培养法
. L+ }1 e; d& J1 M4 ^第三节肿瘤细胞体外生长的细胞生物学特征
) s- ], @4 w5 H! s/ U! ^& E一、肿瘤细胞体外生长的形态学与细胞学特征+ L: h( x1 p& B* {
二、肿瘤细胞的核型和异常生长特性1 `- d1 H3 i2 B# f, L
(一)染色体数目及核型
6 V! r" F4 \) E9 ~, U% J5 c(二)永生性
6 v% p" o0 u. [, T+ L! d/ k2 w4 S(三)异质性7 u7 v* C2 I/ _& w# I
(四)动物接种成瘤性
( x& j: _- ]$ ]( [7 ~" z(五)非锚着生长依赖性4 A" O8 E, U2 P: @1 b8 e
第四节已建立的肿瘤细胞系介绍
% o& G2 N( Z9 x. R L. R9 Q一、国内已建立的人类肿瘤细胞系介绍( `/ Z3 b' z4 A0 _
二、国际上已建立的人类肿瘤细胞系0 T3 j W& H2 y# I
第五节部分肿瘤细胞的体外培养与建系过程
+ J- {# `8 G1 b$ A0 I$ E. v一、人鼻咽癌细胞系(CNE2)的建立
7 ^+ d7 I8 u& d+ x7 G二、人骨肉瘤细胞系(HOS8603)的建立
. M) y. [, F( q' `; P0 V三、大鼠肝卵圆细胞的本外培养; z) V) {0 R. T# E. z; Q& I
四、人神经母细胞瘤细胞系的建立3 E" e7 f: d% W" @
五、人肺腺癌细胞系的建立; h8 g, K) T& j$ i% r
六、有肺巨细胞癌细胞系的建立
+ |# @/ f- F# [! r七、人肾颗粒细胞癌细胞系的建立
0 t" f4 ?5 L: D' Z八、人卵巢癌细胞系的建立
7 E- E& T- v0 y+ I3 g. s* N九、人肝癌细胞系的建立! w5 \# S7 w0 t( |1 o+ k
十、人喉腺泡型横纹肌肉瘤细胞系的建立, n8 X2 r4 E: ~/ u
十一、人恶性胸膜间皮瘤细胞系的建立
* [- `! p! O* P. Q7 n0 j十二、人乳腺癌细胞系(HATTORI)的建立
4 w( s9 w6 k1 `8 p1 Z6 Y第六节肿瘤细胞培养的应用' [% d% F* B9 v- c2 @# v4 }
一、肿瘤细胞对组织浸润的体外研究1 e. ]6 ]6 b+ G0 c! a( l& A
二、人恶性肿瘤细胞的动物移植瘤研究1 e/ g* c; e8 d/ C
三、培养肿瘤细胞的体外分化实验
/ Z9 H# z* ~! o四、培养肿瘤细胞的凋亡诱导研究( g F# W, U. J2 d# L
第十六章病原微生物的培养. u/ |5 e7 g6 S2 M) l( j2 R
第一节病原微生物培养技术概论
/ p7 g. d: B! ]: o: B5 Z2 v一、病原微生物培养的基本原理
1 L1 V/ _" j, ]$ z/ |% m二、病原微生物培养的基本方法和技术+ z/ y' }3 j8 F7 O" H3 q B
三、病原微生物培养的应用
- a( F2 |* |4 G第二节细菌的培养 P9 ]4 Y5 @) `& _) X
一、细菌培养的基本条件0 T4 J4 N- }# a" D! q8 o
(一)细菌培养基8 Z6 z4 y, Q$ }: x
(二)细菌生长的其它条件
" F/ i, K5 Z' p; ^" c2 b二、细菌生长繁殖的特点) h) p( n8 T R& l
三、细菌培养的基本技术
/ d" V( B, C8 g! \ ~6 m+ m(一)无菌操作技术
3 Q. A9 U3 ?4 |- z: \. I(二)细菌接种技术7 p* J0 a' g; `! E. p' ?3 A
四、细菌培养的方法
; P1 C7 B' [& C) }$ p+ f(一)一般培养法5 ?, B" p' I+ Q
(二)二氧化碳培养法
/ s9 t2 M# M' M8 k" {% e7 K& y(三)厌氧培养法
8 z- L; g8 K0 E% Y五、各别类细菌的培养 s; |5 L* B6 M" a& x
(一)致病性葡萄球菌的培养
4 w* ]$ @. B) R+ p7 W% |, M(二)幽门螺旋杆菌的培养, _/ ]' m% I: T% s9 h5 K5 w" V3 A6 M
(三)结核杆菌的培养
. H/ b6 d5 L: @) c. O(四)淋球菌(淋病奈瑟氏菌)的培养4 ~ q* X% K% L7 ?
第三节其它类菌的培养
6 I; L+ Q# N) a. ~& R7 {一、放线菌的培养2 C& {: D9 P. J1 r7 n& i6 [' s
(一)放线菌培养的一般条件5 n1 P' z8 f) @5 h0 m; Y' m
(二)放线菌培养基8 X; x& d; r; d% u( Z
二、真菌的培养6 ^+ R/ A& N7 Y; E
(一)真菌培养的一般条件
$ b9 e% n, I( ]; R* _& H1 X* b(二)常见致病真菌的培养基. o) J8 S+ G' A$ c
三、支原体培养
7 o) b$ k% Z9 m: ?(一)支原体培养的一般条件5 M& J* r, B" O' f5 m( ?
(二)常见病原支原体的培养基0 v# q0 |0 ]5 H$ f8 i# N8 q9 `: M
四、立克次体的培养
3 @1 o# J3 h& ^. W& j(一)立克次体培养的一般条件
; m: y1 L9 C* n# M7 ?" E) n(二)常见病原立克次体的培养" ~/ x% P1 b1 f. k6 T E
五、衣原体培养: R* q6 N, K; j
(一)衣原体培养的一般条件
/ |4 C3 g" H5 h(二)常见的病原性衣原体的培养$ |+ w* s K2 u2 [
六、螺旋体的培养
8 A" I/ m5 t' M* j(一)螺旋体培养的一般条件
7 x# K* u" H. o(二)钩端螺旋体培养基
0 n3 \, o4 b3 b, d0 e+ P0 n/ a(三)常见病原螺旋体的培养
+ q( p; O) E1 z! p4 S第四节病毒的培养
2 G/ k3 x2 k% g2 W& y; P6 D; W; O一、宿主细胞培养法
+ q$ B9 M Z( Z3 @/ @ X; J二、鸡胚培养法
/ B6 u/ V7 @" v; f8 f& |三、各别类宿主细胞培养法6 e5 `% j- C2 S) S" U; u
(一)EB病毒的培养
8 |' D& j8 K4 \% o$ D v0 S/ |, Y9 R(二)脊髓灰质炎病毒的培养
, d( q- ^6 N# y(三)乙型肝炎病毒DNA转染细胞系的建立和应用3 L5 [% P$ N1 E. ^% I5 n6 Z
第十七章医学寄生虫的体外培养
5 l' o0 Q) n! R |9 H第一节寄生虫的体外培养技术概论
" r1 t" X. n( A, ~" e* P$ b一、寄生虫的营养与代谢特点
, g- W: N1 M6 H6 X% Z$ |5 X* ?1 m0 T9 w8 J二、寄生虫的体外培养技术类别
\" o% u0 s. ^! l(一)寄生虫虫体培养; d! H6 F) E" h! g
(二)寄生虫细胞培养: \) M* x6 L/ z% `$ }- y
(三)寄生虫的体外培养常用培养基
9 P: h% M7 i; g, |三、寄生虫体外培养技术的应用
# i( N, z( T. ?# p' H(一)在生物学研究中的应用
" M- H& ?5 r( Z% H- M" i(二)在病理与免疫学研究中的应用 j6 }! V* O: r1 I( f% k) D0 t0 Z
(三)在药物学研究中的应用) W0 k/ f3 B3 v7 ]4 W
第二节疟原虫体外培养
4 _9 S) J; }3 ^! ~7 U一、疟原虫红外期体外培养
! g6 z6 ~ `8 d(一)约氏疟原虫红外期的体外培养: k( I4 O5 r- p/ u
(二)人疟原虫红细胞外期体外培养
+ z2 l0 U' _" k3 H& v5 B& H二、疟原虫红内期体外培养9 ?& [5 i J* F) z2 Y8 i( T0 o+ Z
(一)体外长期连续培养
4 {% Q. @& q. e7 @(二)同步培养法
, y, C" V: Y8 x* E(三)疟原虫冷冻保存技术# V/ w: O# N" A' T
三、恶性疟原虫配子体的体外培养
! O5 [4 S$ m! z o2 h第三节机会性致病原虫的体外培养
% P; ~8 H# B0 U: ~) r4 s一、弓形虫的体外培养6 ~1 G! U+ ~: L
(一)速殖子的培养方法之一：单层贴壁细胞接种培养法
2 y4 y$ \8 g8 |) N(二)速殖子的培养方法之二：悬浮细胞的接种培养法
7 M8 u7 u& P7 Y4 z& `9 n& N1 ?& a(三)速殖子的培养方法之三：在鸡胚中种植的培养法
! y- X. o5 o) i(四)包囊的培养
0 x8 y, t3 C2 }% w8 t- P% D/ ^& ^+ H+ U(五)弓形虫的冷冻保存技术
& x1 J! p" Y6 h- \" J二、卡氏肺孢子虫体外培养
) f$ c7 ?4 m& m2 s, @7 {(一)用非洲绿猴肾细胞系培养卡氏肺孢子虫
; Q4 V' v& z8 d/ P; W: ~(二)用胎儿肺成纤维细胞系培养卡氏肺孢子虫( H% q7 R& b, l$ m3 f. n, f
三、隐孢子虫体外培养% t/ ]% y1 O$ ?
(一)在组织细胞内培养) T0 P" v0 X6 t5 {& M
(二)在鸡胚中培养: c0 [5 f$ ?4 k8 |% D& L( V
第四节日本血吸虫体外培养
1 R4 [; V5 s& S一、培养基及培养条件
9 j3 L5 P7 Z, u. \6 z(一)培养基的种类1 x9 L/ n2 |: o% p
(二)培养条件
3 M' ]8 @* w' g/ b w* f3 i二、各期培养方法2 e- R, F5 L& `7 \
(一)尾蚴人工转变童虫体外培养
" U7 m3 f6 m8 O' w5 J# p4 d(二)肺期童虫体外培养" w' b4 o7 W% j1 H: L" F9 X
(三)成虫体外培养
/ G" M6 I# Y( R8 q(四)虫卵的体外培养% u2 G! d8 Y& B5 B$ u6 f# t
(五)毛蚴至母胞蚴的体外培养4 o6 v! C+ P+ p& ^
(六)子胞蚴和尾蚴的体外培养
' `5 m0 t' j/ t: U/ N(七)血吸虫成虫和童虫细胞的培养& ?8 K G w7 m+ l0 b2 g, O- j
第五节棘球绦虫体外培养; T5 j0 L9 [) Y8 o, w8 S$ c4 U* K
一、细粒棘球绦虫的体外培养5 w+ w; P4 C6 r( S$ `# H
(一)囊型发育) A" g- V% D3 Q. O. S0 I9 E
(二)链体发育& H0 j% D0 V$ q
(三)成虫体外培养5 u5 R- w; x3 F" g8 J
(四)细胞培养
2 E6 y$ _2 X9 o: P4 [二、多房棘球绦虫体外培养+ N& n4 H: O/ \
(一)多房棘球绦虫虫体培养+ u( O9 p: K/ N4 ?7 @( } E
(二)多房棘球绦虫细胞培养) B8 f/ v0 o# g0 ?; U
第十八章无脊椎动物组织的体外培养1 [% r6 f2 M5 w
第一节无脊椎动物细胞培养的基本方法和技术; N* T+ C7 z( ^. S" X& b
一、体外培养无脊椎动物细胞的基本条件9 j. a% @4 \8 D+ J, b T
(一)无脊椎动物细胞培养基: p( @; R2 R/ B; `! U
(二)无脊椎动物细胞常用培养基的配方
) l8 K8 M: W- t: \$ j(三)昆虫组织培养基的配制
P8 H0 N X- [1 ?* Y(四)体外培养无脊椎动物细胞的其它条件
# r2 E9 `4 [# E8 A" `二、无脊椎动物细胞的原代培养
) f5 e. K# p; D% k0 N三、无脊椎动物细胞的传代培养
r3 r. Y- U7 i# E: t2 u四、无脊椎动物细胞的悬浮培养
" W e7 g; c1 D q# x五、培养细胞的低温保存和冷冻保存2 r4 @# y2 A2 u- E0 F1 {" Q+ t
第二节无脊椎动物的器官培养4 G# {, {# e# @5 ^' i K( Y- Y0 V
一、软体动物器官的体外培养
' P, R3 S' A. Q- P4 L+ j二、蠊翅目昆虫的体外器官培养
8 G: s! S6 I, d- n, I+ ^5 D4 u3 t H, ~第三节无脊椎动物细胞系(株)的建立# [* u% \" S+ x3 \
一、昆虫细胞系的建立! n1 k; l; L( d) H
(一)鳞翅目$ M E0 {* `. `7 `. u$ z" L
(二)双翅目" e; T8 {8 @, e( K( K+ `
(三)蠊翅目
& X" f+ c( g- V二、昆虫缺陷型细胞株的建立+ @ S9 ]2 Q+ N" K: M* b6 i* m
三、软体动物细胞系的建立/ \: a5 c+ l4 N7 N L, |. u
(一)蜗牛细胞系的建立
+ i1 m! I8 ?8 D( J2 B' r(二)牡蛎细胞的离体培养
5 H8 [! @& G) V/ u/ b3 _四、蜱螨(扁虱)细胞系的建立
`" a& g1 c: n5 T3 K五、建立细胞系的注意事项
* N7 F3 R3 V& } a% I, y/ K第四节无脊椎动物细胞的大规模培养- I e- D3 a/ L* Y
一、大规模悬浮细胞培养的添加剂
& @/ a& T$ @3 t. N) k1 u/ |0 [二、低剪切力连续生物反应器* y) v4 _, A+ T% H+ ^4 m* T2 C
三、有血清培养基扩大规模培养昆虫细胞技术' `7 h. _: V, n
(一)扩大规模培养的主要材料 r! t8 g% N( x! o2 e% ~
(二)扩大规模培养方法
" u$ w& ^( k- }9 @, B+ y1 P四、无血清培养基扩大规模培养昆虫细胞技术# g4 Y5 m3 O0 \% v9 x
第四部分体外培养技术的应用
* d& y7 t0 A% u+ ?0 |# ^7 f, t$ E第十九章体外培养的应用技术
4 x3 q3 F/ v$ d第一节细胞分化与体外诱导分化( F1 E7 G; y F7 ^( N
一、正常细胞分化* b# k% I' ]5 J5 U) D) T9 e
二、EC、ES和EG细胞系3 v1 S2 s+ T$ r% ~$ R$ R0 x
三、ES和EG细胞培养和建系的基本技术! m+ y+ G" X2 u6 Q' ]! U5 A$ L
(一)饲养层细胞
$ O1 s/ U* M" F$ A) g1 t& `(二)胚胎细胞来源0 F0 p1 O2 m) L" [/ ]8 c/ r4 i3 k
(三)ES和EG细胞的培养过程
6 K3 S# x2 u+ i# _$ A(四)ES和EG细胞系特性和鉴定! ~# d# u8 N1 {( P- X
四、ES细胞体外诱导分化
% R, w0 d6 M$ N# @(一)ES细胞体外诱导分化的意义3 e* @; S; P, z% e( l) V; R# H
(二)ES细胞体外诱导分化的基本原理! S5 ]4 W( B6 o' g6 I4 p
(三)ES细胞体外诱导分化的基本方法% |: B$ B, ]5 h3 e7 R
(四)ES细胞体外分化的细胞类型
, n8 C7 o: h! y% f) Z. T五、诱导分化细胞的永生化( {. g, R9 P4 e! \; L
第二节细胞融合技术
4 j- Y2 v. {& P* |一、病毒融合法4 k# E, H* A( Y9 q6 c0 w# j/ N
二、聚乙二醇诱导细胞融合法' s( ^) `9 n) Z8 V2 s$ l
三、电诱导细胞融合法9 q, \/ _" m- I& j' M
第三节体外受精技术* r8 n! @2 R) \: b5 B" T
一、体外受精的基本实验条件8 c: E/ [2 q( q7 q7 n
(一)体外受精所需的主要仪器设备和消耗用品0 d2 h( V$ I5 W! @
(二)体外受精与胚胎培养环境的设备和管理2 b4 P! K w7 F( H/ q. Q# A3 a
(三)胚胎培养液
! K1 n7 T4 Y* k) T二、胚胎的体外培养 \0 x: a' v: i% u B8 I$ p) K
(一)卵母细胞的收集) [( k) G/ L$ l0 B5 q' E
(二)精子的体外获能" F }5 O) f! @% }/ I" h: |
(三)体外受精
9 i( s/ r" R R) [3 i: ?(四)卵裂观察及胚胎评分
$ X8 S3 {9 J( F/ a2 {+ t三、胚胎移植
l7 ]# q+ [ M' c/ F3 x4 X第四节基因转染技术与体外细胞转化
6 h8 Q/ r }( |) o( O9 P0 j一、基因转染技术
2 y0 D" ^/ `& S(一)待转染细胞的准备' I, y4 r c6 M
(二)质粒DNA的纯化
% ^5 s8 V3 }1 W7 y(三)基因转染的方法$ }* R, [+ i5 L5 Y9 \9 {4 l P
(四)转染细胞的筛选
, _5 a# a0 v6 P: F6 c二、体外细胞转化1 X. M- a/ Q* b% K7 F
(一)细胞转化的概念与细胞转化的过程
/ }1 t3 L" T$ H# S N(三)诱变因素诱发培养细胞转化的程序4 P8 w) H- G. X% [% `& r- D' Z
三、转基因动物* g- @5 [" e6 K$ ~
第五节杂交瘤技术与单克隆抗体制备技术7 ^# }$ R. s/ Y7 _* e% I0 {5 o
一、杂交瘤技术
2 _0 }$ f3 ?+ k5 T9 l0 B(一)B淋巴细胞杂交瘤技术的实验流程$ M4 J1 J4 T6 S4 Y, e( U
(二)应用于杂交瘤技术中的培养用液
/ v' a9 [) i* q0 F( R; ^" `1 L(三)杂交瘤细胞的染色体分析) y, u: R$ C% }5 } n
二、单克隆抗体
- g4 k- h* n( y, ^% ]. c(一)单克隆抗体的概念2 `, @; M3 ?! e+ a# x1 j# h
(二)单克隆抗体的鉴定+ T, y7 g1 y$ ? t9 M; d
(三)单克隆抗体的生产和提纯
/ `- A1 m% B+ B(四)单克隆抗体技术的发展: A8 y# s& O" E9 h& B
第二十章动物细胞大规模培养( R' E0 M0 Q6 ^ H$ N# O- i
第一节动物细胞培养有关的特性; E+ J1 ?7 ?, ~5 C/ p
一、动物与微生物细胞的差别
4 ~$ \8 r, n- c: B二、动物细胞生长特性
$ ^0 Z4 A& L9 S, F第二节发酵! W; x& k$ L. z6 M4 ]2 i" d& y
一、培养方法
! {. c8 \( L( v0 Q: B3 c( Z(一)贴壁培养
6 ~+ X# o J2 M$ t" i(二)悬浮培养8 I" E$ e( p5 K- h$ u$ [! B D
(三)固定化培养
, P8 h; ^6 g6 w( l% |$ Z* C0 \0 Y二、动物细胞培养的发酵工艺
! t3 N' P, u! e7 H1 Q(一)分批式培养3 r! ]4 i* z n! ~- e0 k) }
(二)流加式培养* C6 [3 ^. E. G- k1 R2 b
(三)半连续式培养$ j/ o7 T: T1 U% D, l) _
(四)连续式培养
8 J( O4 _7 y: \* b(五)灌注培养8 z. B( F( L/ s& J
三、发酵工艺条件及其控制
# o( u3 z9 {( W4 K(一)培养基
; P5 o, l% J5 w4 r. W' e(二)培养温度的调节控制% k1 Z$ }! }7 \& V6 o- Z: F
(三)培养液酸碱度的调节控制
+ o( w# V V* N2 N! Y* f9 u(四)溶解氧的调节控制* |4 j1 m l- Y3 U0 T' U+ }) i0 R6 p
四、动物细胞大规模培养用生物反应器; m6 p% O7 l$ `( y* V
(一)搅拌罐生物反应器9 U/ Y9 W2 c5 ^
(二)气升式生物反应器
5 F: d. Z2 J7 r* o! C(三)鼓泡式生物反应器
9 y# q. {1 I7 {. Q( F" l(四)中空纤维生物反应器
+ u5 p" k( N6 x% t3 O- ` F3 v# [第三节动物细胞微载体培养技术
; S* [4 l: ~& I" ]一、动物细胞在微载体表面的贴壁生长机制0 u% r3 Y: l" q) c [# O
二、微载体的主要特性, @& k0 v8 f+ D4 p' N: D
三、微载体的种类及其性质
- v6 P j. T5 z(一)交联葡聚糖为基质的微载体
2 ?* V9 J6 p9 {0 Y(二)塑料为基质的微载体, T* x$ u. V' Q& N, B* E
(三)明胶/变性胶原微载体
9 `9 T9 `0 n1 a+ F9 Q3 [& V(四)玻璃为基质的微载体6 C4 q9 v9 c7 T( T1 U
(五)纤维素为基质微载体/ {* S& u* @6 s, Z
(六)液膜微载体
; y! ~7 b, G9 V" X(七)大孔微载体
( ^& B2 Z. p) t" D四、微载体的选择; ?& n+ Q8 A# a; v9 {7 b' z
第四节动物细胞大规模培养技术的应用
2 |3 I; T8 Q" K6 m% r) d一、在疫苗生产上的应用
2 B% N0 p* @6 r7 S$ M二、在干扰素生产上的应用0 A# \6 c5 o. ]; o
三、在单克隆抗体生产上的应用. c2 Y9 y& V- [( D
四、在其它基因重组产品生产上的应用# C1 V+ H7 q' [) o+ a* T* P
第五部分植物组织细胞的培养
/ j& J3 C' z: {3 [1 |% [6 J第二十一章植物组织细胞培养的基本原理与技术8 S! I4 {1 D. c6 c( x; y
第一节植物组织细胞培养技术的概念和类别
6 K* ~7 N% M- ?一、植物组织细胞培养的基本概念 m+ b0 s) L3 p2 q+ C, I- I
二、植物组织细胞培养技术的类别
+ s$ B( C) m2 G/ P" k8 C% m第二节植物组织培养技术的发展简史
8 o! s$ |$ j1 x& Y- k; w4 E: r% k一、植物组织细胞培养技术的创立阶段8 P% w: \/ k6 H9 m0 r" L2 x, J
二、植物组织细胞培养技术的发展阶段% S% [( M8 f" Z1 `& [8 Z( V# f. f
三、植物组织细胞培养技术的应用研究阶段
' G+ g/ k0 O8 U2 Q9 z8 d第三节植物组织细胞培养技术概述$ k$ P v1 n3 s7 Z
一、植物组织细胞培养的基本条件 C, N' v: U( Q; I- w0 y: M& |6 }
(一)植物组织细胞培养的营养条件
0 S: G2 M2 y$ A* |/ f) A0 p3 F(二)植物组织细胞培养的环境条件% i# p* m- w0 [# E/ f! @
二、植物组织细胞培养的基本方法和技术1 l( S8 w" |( I$ d1 {* r
(一)植物组织细胞培养的基本方法
- b& p! _! A( x- h1 {# T(二)植物组织细胞培养的基本技术$ w! ^2 D0 i' f' M$ k) F# n# a
三、植物组织细胞培养的基本程序, g% p9 h, k: g8 N- B- z
四、植物组织细胞培养物离体生长的基本方式
8 h6 W1 p$ e6 X J(一)直接芽分化的方式2 h, F' ~! e( X/ A+ F8 s
(二)通过愈伤组织形成的方式
; B" F, l6 A% w(三)胚状体形成的方式7 J9 Z. W5 u1 H# c5 v) P
五、植物组织细胞培养物的鉴定
- P$ ]. e7 S1 }! C8 \(一)植物组织培养物的组织学观察0 B% A5 H* ?5 q: c
(二)植物组织培养物的染色体观察- {: ?+ o1 G5 O9 ]2 a; p
六、植物组织培养技术与动物组织培养技术的异同
5 e" A1 Q2 E7 Q. X第四节植物组织细胞离体培养时的生物学特征
3 b, d N5 D, e* k! y$ \一、植物组织细胞离体培养条件下的全能性' @$ T( M. J2 _8 E) N" c
(一)植物组织细胞的全能性具有普遍性. j, B8 N$ @) Q1 y
(二)植物组织细胞全能性实现的途径
7 y- ]/ F7 b% I: o- B! y% x4 n! ?二、植物组织细胞离体培养条件下的突变性
" F( i" m9 s, Q p% d! i. i(一)植物组织细胞的变异性具有广泛性) p0 v' H) ?4 G
(二)离体培养的植物组织细胞变异机制( K y" W: n) R8 I: k8 a
三、植物组织细胞离体培养条件下的类减数分裂现象
& l1 i m, W( i0 z! S( [(一)植物组织细胞类减数分裂现象的存在
. \$ b6 R- i4 F$ d+ A(二)体细胞类减数分裂发生的机制
/ t9 s+ _: m4 }8 C第二十二章植物组织细胞培养各论
. [! [7 t" h2 E- ]; ]1 _第一节植物的胚胎培养# w; S. Q Q3 d
一、植物胚胎培养的概念, b5 H" z2 E: Y ^$ k
二、植物的幼胚培养; i1 Z1 `& M5 o; h) w$ v L/ a1 ^' y7 d
(一)幼胚培养的基本过程7 U* x e% ~9 f0 Q
(二)植物幼胚培养的实例
( D2 W3 R3 O9 J! V$ u6 t三、植物的成熟胚培养9 t' q2 E1 x& Z6 B- J
四、植物的胚珠培养6 _3 v' Z; p% c. Y
(一)胚珠培养的基本过程
* g$ i2 R( h3 \- Q(二)胚珠培养的实例8 G: K7 f; V& \
五、子房的培养
6 K* h, l5 P! d6 T4 Z& m$ B. J(一)子房培养的基本过程0 G7 f2 g; U0 a
(二)植物子房培养实例
5 W, i/ |3 k9 B _, E2 I六、植物的胚乳培养7 `+ D) o0 ~8 R$ w" u6 V5 K3 U! K
(一)胚乳培养的基本过程
- n& e9 }. g8 e4 o; Q" |0 F(二)植物的胚乳培养实例6 K2 N% J Y8 N: g. }* L; q6 ]
第二节植物的器官培养
8 i4 p1 _1 A5 K3 U- `6 S( X9 @7 B一、植物器官培养的概念2 \+ ~! ]8 l9 ?* `' r( C
二、离体根培养
7 a) b$ z" n; h* S1 \) V(二)根培养的基本过程 D$ o/ k- d5 Q2 B
(二)植物离体根的培养实例; l8 l; S7 P9 Q2 B
三、离体茎培养
. f, @" m, N9 m- q(一)离体茎培养的基本过程! e, Z2 h3 v* A
(二)植物茎尖培养的实例5 E0 K7 g+ r7 A1 f+ X! o
四、离体叶培养
4 F# F. v; v8 A# q(一)叶培养的基本过程, ]- I3 s" S: L2 L: O9 s+ g) q
(二)叶器官培养的实例
# T6 S; o0 |$ Q" T' A& N. H8 G五、植物花器官的培养
( p/ C8 K$ O( [% {/ |(一)花培养的基本过程
% X5 z( k* Z" Q9 O(二)花器官培养的实例
! O0 n8 l5 \. b. G- \ _5 D$ k六、植物种子和果实培养
: }1 X' g2 t2 I2 y9 ]8 w; a(一)种子和果实培养的基本过程
' a" Q5 Y ~; b2 |7 {) B7 I(二)植物种子和果实培养的实例, }2 g/ Y) r# q) B8 K# [7 \: O H
第三节植物的组织培养: m Z3 s" t5 l) {
一、植物的组织培养概念: j" x* e/ _+ e7 _8 F
二、植物愈伤组织的培养
/ }' e+ d6 a' X$ D) Z( p5 ~1 ^三、植物胚性愈伤组织的培养
2 a* u' n- W' y6 ^6 ^& H+ t(一)植物胚性愈伤组织培养的基本过程& a* P( q; W5 w8 I) f
(二)植物愈伤组织培养及植株再生实例8 S5 ^% }3 b0 T6 `
第四节植物的细胞培养2 j4 v6 X* V4 F: S" H. m! ~9 x
一、植物细胞培养的概念6 C# s3 c: j- O' @) R
二、植物细胞悬浮培养7 v1 k6 D0 |! h
(一)植物细胞悬浮培养的基本过程+ j0 C3 M3 Q. X0 ~8 k7 `2 D; g3 q& l
(二)悬浮细胞的培养实例
( G2 f* J* ?, j, ^0 t7 n7 i三、植物的单细胞培养1 n/ \0 c0 @: Y V0 L
(一)植物单细胞培养的基本过程+ r* B i0 L: e8 {) W' `/ G
(二)植物单细胞培养实例
t; @. @: C" y9 b第五节植物的花药与花粉培养" W; I5 A1 C- j+ s* O X
一、植物花药与花粉培养的概念
( ~7 d4 M: c( C% @! q2 `二、植物的花药培养2 y7 b( W+ P8 T" T' u
(一)花药培养的基本过程
/ l3 q" D/ _8 E1 `(二)植物花药培养实例
/ e' y& ]9 v8 P0 [三、植物的花粉培养1 y" Q% h, r$ h7 V
(一)花粉培养的基本过程
9 G$ f6 S0 W8 {(二)植物花粉培养实例
' ^! _: r' c! @; g' ?; }第六节植物的原生质体培养
8 V' z7 a8 b" r2 S一、原生质体培养的概念
; u8 m9 G1 u) K7 a: O, i二、原生质体的培养
' i, }" s; d0 f& k+ a0 l; E2 }(一)原生质体培养的基本过程( n, T) L& ~1 M
(二)原生质体培养实例+ K; y) ?. Y; r9 x9 R: a
第二十三章植物组织细胞培养的应用
o' W s# A, b1 l5 c第一节植物组织细胞培养的应用技术( z& ?- E/ b; ~) h
一、植物基因转移技术
+ M: V! D# @' v$ S# d' ]6 f(一)植物基因的获取
' ?5 u0 P% j) N) `! }) W(二)植物基因的载体
# s' _$ ?+ b( [- @+ E' ^(三)植物基因的转移方法
( [& ^7 W4 W- s! j(四)转基因植物的检测
! w& }' w! b. ~8 l$ ]9 g% Q7 g& C% H(五)植物基因转移实例
, q$ a2 h, ]1 Z0 N* O% @) {二、植物体细胞融合技术
$ ?5 K& D. m3 q& Y0 T" A(一)原生质体融合的基本方法
+ y W( Z, b5 N4 Y8 x(二)原生质融合体的生长发育. v5 g6 p6 l8 _9 i8 M A5 ?
(三)原生质体融合实例
0 g. N0 g: [0 X; l) B \* I2 x, s三、植物体外受精技术, t9 a4 M4 f7 C! ?' d! G
四、快速繁殖植物技术/ M2 X: J% Y0 U4 g2 \( Y8 {
第二节植物组织细胞培养在农业上的应用( }! l, ~7 U" i
一、利用植物组织培养技术改良植物品质
( T) o( a9 y8 E3 E; d- x(一)利用植物组织培养技术进行倍性育种
- H4 G7 Q/ y: L" D0 o* S' @(二)利用植物组织培养技术进行远缘杂交育种1 }- K" W. ]8 }/ o( |: B5 F8 B+ R
(三)利用植物细胞培养技术进行突变育种
~& ^4 U# o: `# d2 ], O二、利用植物组织培养技术培育脱毒植物
4 Q' c B* R7 R$ R$ a(一)利用茎尖培养技术进行植物脱毒# d* E5 @9 ] A' [- W& @& T6 `4 _
(二)利用植物组织培养技术进行植株脱毒
9 J$ T4 |+ { k* K* D(三)利用植物组织培养技术快速繁殖植物
+ a4 c7 | N F. }/ x三、利用植物组织培养技术保存植物种质 x, U2 \: h0 G! r( A5 b1 P
(一)植物组织细胞超低温保存的优点
, Q( {% U) N$ `, T+ v) @5 n9 S(二)植物组织细胞超低温保存技术& ^; E$ j' h2 _8 C9 s
(三)植物超低温种质保存实例
$ |* Z( c9 S( p四、利用植物组织培养技术合成人工种子
7 @4 d j2 L4 L% l2 {% p(一)人工种子的特点
9 F. g+ p7 ]5 Y7 t6 y8 J(二)人工种子的应用前景
1 Q2 @5 a6 X6 h5 |% S9 h6 U, K(三)人工种子制作的基本技术
$ m- c' H1 C: M6 D) z& L(四)人工种子制作实例% u: I) d) G( U2 @1 E4 U
第三节植物组织细胞培养技术与植物产品生产/ b( {" B# j+ A, L! D
一、利用植物组织细胞培养技术工厂化生产试管苗" ^% _" C& }! \( g ]
(一)用植物组织细胞培养技术建立植物的无性系* w8 o' K4 N3 I% ?* @8 F3 ~
(二)试管苗工厂化生产实例
' i) f7 C K5 u' V$ z4 z二、利用植物细胞大量培养技术生产植物产品
) T$ [1 M- [5 d: A( v0 J0 V7 d(一)培养的植物组织细胞积累次生代谢物的特点& s5 W2 F3 e* U: Z. l9 g
(二)培养的植物组织细胞积累的次生代谢物之类别/ W8 m& h7 Q0 z, R) ?" B
(三)利用植物组织细胞培养技术生产次生代谢物的方法$ s1 V# t- w# p J
(四)利用植物组织细胞培养生产次生代谢物的实例
& \( o7 R) L9 T1 M第四节利用植物细胞培养技术生产植物药7 s) y2 U/ Q. e4 d F: v& W- P+ R! }
一、利用植物细胞培养技术生产植物药的优势和不足4 v# c x( G) Q8 q8 v
二、利用植物组织培养技术生产的植物药的类别! z# X8 `- K$ w: c
三、植物药物生产的主要技术5 o Y- E; g8 S1 D6 [
(一)发状根培养技术
0 x; k' X# K2 V6 j& k& u1 X(二)两相培养技术1 K3 f6 q% W1 R3 K j$ O8 T+ N
(三)反义技术# K% J( d. W, k
四、利用植物组织细胞技术生产植物药的实例) E9 S" Q8 r5 T$ t) O8 u$ m% o
五、植物药工业化生产实例1 w f) W) V0 Y6 R9 q. }
附录
" `2 I" k# M }/ I9 A4 Y附录Ⅰ无血清培养基及添加剂供应商一览表
1 s- b0 o% y. \0 O/ Z* |- n6 @- @附录Ⅱ水合物的等量值表
2 I/ U9 ~) x5 L0 K% w, O附录Ⅲt界值表0 b2 t4 o. C o m" |9 S$ Z
附录Ⅳ离心机转速(r/min)与相对离心力(RCF)的列线图8 V# A; J$ |9 s; k: X0 h
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发表于 2011-3-20 08:51
发表于 2011-3-21 11:20
