关于转染

wangyimei

提高病毒的滴度，首先要提要转染的效率，在转染293T细胞的时候有没有什么特别需要注意的地方，每次做的时候转染效率忽高忽低很不稳定，请教一下大家

wangyimei

我用的是lipo2000

qingbao

lipofectamine 2000转染293T如果细胞状态好的话，转染阳性率达到70~80%应该是没问题的。如果保证操作平行的前提下，效率高低不稳定可能主要还是跟细胞状态有关，以前我转染的时候基本可以保持这样一个阳性率。
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按照2000的protocol操作就可以，主要的几点是：保证细胞状态、传代时间（保证转染时细胞处于对数期）、细胞融合度、转然后四五个小时换液减少毒性。
$ i; u9 j7 k8 {) ^) K6 |8 D还有一点就是protocol中的2000的用量其实是大大过量的，我们以前只用到建议用量的一半就足够了，有时甚至用到四分之一。减少用量除了可以减少费用之外，更重要的一点是，脂质体对细胞还是有一定毒性的，减少用量可以降低对细胞毒性。这个用量楼主可以自己做个梯度实验。对于293T细胞虽说成了细胞系后都有癌细胞倾向，但是相比较于其他的肿瘤细胞系，它还是相对脆弱的，要小心伺候才是，所以降低脂质体的量也有出于这方面考虑。

amosummer

首先可能和你的细胞状态有关系吧，一般好像都是在汇集度90%左右进行转染，效果会比较好。当然如果细胞长势比较良好，没有受到外界污染的话，应该效率也会高些。其次转染试剂应该也重要，脂质体转染可以比较稳定表达，但价格会昂贵些，而磷酸钙转染的瞬时效率还是可以的。这些转染试剂与细胞共培养时间也需要摸索吧。

jiays

293种板大约60%，24h涨到80-90%转染 ，效果一般很好，细胞最好在贴壁24h转，久了效率会随之降低，

张也行

我用LTX PLUS 转的，按照说明书的用量，70%-80%转，效果很好。关键还是看细胞的状态。293贴壁不是很好，可以铺一层明胶，效果还不错... ...

crystal

哇，好漂亮的荧光啊！

一枝独秀

回复 wangyimei 的帖子
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* H8 Z" g5 \$ g7 Y" ~+ f# @我认为293T细胞本身的状态最重要，最好控制传代代数在10代以内，细胞融合70-80%

wangyimei

恩，收获很大！谢谢大家！7 ]: M( `5 c+ y0 y* i7 l1 ^4 \8 k

wangyimei

回复 qingbao 的帖子: g: n0 e8 X& J/ [% t
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你好！呵呵，请教一下，你说的就是转染的时候按照lipo2000 protocol来做，而2000的用量可以减少到一半，你的意思就是说，譬如我用六孔板转染的话，质粒的用量还是按照protocol的4微克来加，而其对应的lipo2000的量就在说明书要求的用量上减半是吗？% |7 M' b2 p4 V# f