请教有关皮肤成纤维细胞培养

sailboat

打算做皮肤成纤维细胞培养（原代），看有的文献说需要用胶原酶 有的说不需要，很想得到答案0 y" M9 a5 _! T) U1 O6 I+ l0 `
还有，看到胶原酶还有分型，代表什么意思呢？分型是什么意思？都可以用吗？+ {: x. T; F" ?
如果用胶原酶的话，消化浓度是多少？. T: @( b, W1 ~+ w% Y+ Z1 O
最好能系统些
, n& o2 W9 v, C9 k' B! n7 x拜托各位达人了

tangyvhuang

sailboat 发表于 2011-2-23 17:05 $ f* V/ I$ c2 ~, U
打算做皮肤成纤维细胞培养（原代），看有的文献说需要用胶原酶 有的说不需要，很想得到答案
3 z6 x4 |$ x2 v, b3 S还有，看到胶原 ...

1 c$ t. H4 K" H: q( `
这个我们以前做的都是组织块贴壁的方法，酶消化好像是用胰酶消化的，37度30分钟，没有用到胶原酶，对于胶原酶的分型讨论比较多了，个人比较推荐II型胶原酶的。主要是这个对于细胞没有伤害，消化时间长点没关系，要是胰酶的话消化时间过长的话细胞都破损了。

luwei8157

皮肤真皮成纤维细胞过去用胰酶是因为实验室条件不好，胶原酶比较贵。
5 e; c- |% \7 ]7 {真表皮分离，用dispase酶4度冷消化16h 一般可以将真表皮分开，镊子可以剥离。
& p4 Q1 u+ K1 C! a& O% [) r( j  V组织块法比较传统，就不介绍了。
" J- O: D5 {8 f或者酶消化法，用325U/ml 1型胶原酶消化被剪碎的真皮组织，消化1h左右，然后加入培养液吹打 100目过滤，离心 培养。

fish_zbw1985

分离组织中成纤维细胞用组织贴壁法足矣，等的时间长一点细胞都从组织周围爬出来了。酶法消化用胰蛋白酶就可以了，如果觉得0.25%的浓度对细胞损伤过大可以选择0.05%的胰蛋白酶消化。胶原酶没有试过，比较贵吧

sailboat

用dispase酶4度冷消化16h 一般可以将真表皮分开，镊子可以剥离
4 r( y, L- c6 W! ]: q" Z/ ? 7 o# O9 ~5 R4 [
请问 可以这直接分开吗？dispase酶消化的作用呢？不会消化下一种吗？

sniper

0.5%TE + EDTA，消化能力就很强了。不过要看做社么物种，如果山羊的话0.5%TE，而小鼠0.25%TE就行
8 {2 L, U/ v) ~: Z  Q

OBGYNob

我看过有关文献说用胰酶就好，但是本人使用该方法之后没有成功，伤心中....难道真的要用胶原酶？

runsong

用组织块法吧，我们这里用此法从牛耳分离的成纤维细胞状态挺好的，筛单克隆，做核移植都没啥问题。
6 z$ v2 c0 q/ H' ]前体是细胞要用GIBICO血清养，而且不能换。

pheebs

Dispase 很贵的啊！！！！！！！！！1

receiver1

用Dispase分离表皮和真皮，然后真皮组织块培养法获得成纤维细胞。这一方案最可行。& x- J( o/ D) ]$ g5 ^+ P$ F9 G& h
$ J4 {0 \2 ~9 c; X/ R0 j" s" w
当然Dispase有点贵，但是实验室必备的，因为这种酶的作用比较温和，不像胰酶那样剧烈，一般不会对细胞造成致命的伤害。