关于培养中的真菌污染？

happyending

细胞培养中污染时最头痛的了，细菌污染一般培养基会发黄变成像果汁一样的那种颜色，在相差显微镜下也难判断是什么细菌污染，最近在看一些帖子说，真菌的污染时，一般培养液是清亮的，而且真菌生长叫细菌慢，我想问下有经验的同志，一般真菌污染了多久才能发现呢，一定要等到长出菌丝才能被发现时真菌污染？谢谢！

nydfy

首先要尽量避免可能污染的途径，其次，可以加抗生素抑制微生物生长，参考下表：
" l# @* U5 f# y5 u" f( b! R抗生素使用种类与浓度：
$ p) f6 w7 x  g% D+ C5 ^. C% v                          工作浓度        储存温度        杀灭细菌% m; U3 Q/ p/ F! J6 P% ?
penicillin                         100 units/ml         -20℃        G( ) bacteria5 V0 y9 R. g5 V' H  K1 \- m, b
streptomycin        100 ug/ml         -20℃         G( ) and G(-) bacteria* [9 \$ z4 C0 ^: U
chlotetracycline        50 ug/ml                        - 20℃     G( ) and G(-) bacteria
) i- a; I# ], p$ e1 Ogentamicin         50 ug/ml                        -20℃        G( ) and G(-) bacteria, mycoplasma7 Z1 }1 W4 G9 X5 Z- c( d7 q
amphotericin B         2.5 ug/ml                        -20℃        yeast and molds
6 o7 W5 R6 e9 q( s8 ?6 N' c) Hnystatin        50 ug/ml                                         -20℃        yeast and molds
8 q! F0 b" p8 ~8 e$ W, V1 c+ l1 kfungizone        2.5ug/ml         -20℃         yeast and molds
6 S) X' ^3 E5 Z3 t* T" j/ d

ljzmy82

应该是等到长出菌丝的时候才能看的比较明显，一般说来真菌污染不会立即产生毒素杀死细胞，而是随着培养时间的延长，真菌逐渐增多，当其数量足以和细胞抗衡的时候，细胞才开始死亡，真菌污染是件很麻烦的事情，一旦发现时真菌污染要重新消毒杀菌培养箱，以免残余的孢子会继续污染，以至于整个实验室都是孢子的气溶胶

deron

果汁一样……' k0 d5 G& d' [. I8 g/ a% \! u5 X
基本是长出菌丝后才会发现，甚至由于真菌初始阶段对细胞损伤不大，有时候瓶里长出菌落，没有仔细看还发现不了

happyending

恩恩，谢谢大家分享经验

清影

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) ~! k9 r0 k7 C- [2 B
' }) }  ^: [2 k. @. X+ [顶！允许的话可以使用两性霉素B或者抗霉菌素以防真菌污染

kingchen81

如果是实验研究的话，可以加抗生素。一般的加双抗，如果是做大鼠的话，其实加庆大霉素效果更好。因为经常是肠道的阴性杆菌污染，庆大效果更加，而双抗反而效果不好。霉菌可以用两性霉素B。
& Y7 A2 x" e% F, V; n如果是临床应用的话，使用这些抗生素就要慎重了，因为难免病人有抗生素过敏的，所以还是尽可能的在培养的过程中注意无菌操作。
4 D6 I/ \6 W! G其实细菌污染比较好处理，扔掉就OK了，而且其实只要经常仔细看的话，在显微镜下是很明显的。（当然本人原来是学检验的）。霉菌的话，霉菌孢子仔细辨认还是很明显的。空气中要好好消毒。不要存在侥幸心理，觉得一批细胞还只发现1瓶，其他可能没事，继续操作下去可能会全军覆没。
3 T, }, K( ^/ @0 L- f" {% B其实还有一个严重的是支原体污染。那是看不见的。往往要一个星期左右才会发现，已经晚了。( ^0 X/ j. P. m4 n0 n, Z2 ]
所以最重要养细胞还是要养成良好的习惯。无菌观念时刻在心。

柏林小杨

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8 J. y9 d* o1 K/ _感同身受啊
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