关于N2B27培养基德配置

随风的天使

请教大家，在胚胎干细胞培养时使用N2B27，如何配置培养基，请大侠指教！谢谢！

深海寂寞鱼

to 随风的天使 ：
& T7 n8 w$ Y, }0 e: E
) @: K( P8 }3 z* H     N2 (100x)  5ml/支, B27 (50x) 10ml/支, 直接加入到500ml的基础培养基里（比如，DMEM/F12）就可以了。
/ v  p- ~) y0 d% u1 S% g
+ f9 D! a  m8 D, ?# G+ `3 a     这样就是通常文献中所说的，1% N2 and 2% B27。
' O# x9 T$ H  F  g9 I* d$ e- f1 g  v+ U# p
     希望我说明白了。

随风的天使

回复 深海寂寞鱼 的帖子
  G( z" C" ~& H# X5 b( f7 d% |9 ?9 v! N  E* I7 S9 F. z
谢谢你，我看很多文献还要加胰岛素等等很多东西，如果培养胚胎干细胞它只是临时的代替血清吗？其余的成分是否需要改变呀？谢谢你！

深海寂寞鱼

随风的天使 发表于 2011-1-13 09:36
4 B. U) |1 }, [2 z; [, H回复 深海寂寞鱼 的帖子
2 y- l0 {: r3 o! f0 T, |( N5 L3 X3 M( T$ M( c7 x+ L# g$ B
谢谢你，我看很多文献还要加胰岛素等等很多东西，如果培养胚胎干细胞它只是临时的 ...

' E3 U( a9 H3 m! H) A7 _$ Gto 随风的天使：& d) k! v7 O& h! Z. i  ^
' b$ \# P- q: e- M" d$ V& x# h
    B27和N2就是用来替代血清的。血清的成分十分复杂，而B27和N2的成份是完全清楚的。
' \+ d% u$ L% H$ s( U
8 t* K* N6 Q; v7 x% H    有关B27和N2的具体成份，请你参看论坛里的这个帖子：http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... 2B%B3%C9%B7%D6.html) l9 _- C1 o* b6 j/ @9 s
$ V/ T: X! v+ n# r% K8 \1 X6 X
    这样你也就可以知道，其实B27和N2里面是有胰岛素的。  R$ Z4 f/ _" }

. y% @: ^% w$ w# M+ i7 n; ^    我不知道你具体看的哪篇文献。你注意一下它是在加B27和N2以后又加了胰岛素吗？. O3 t" f: X9 k" E/ y5 Z8 F# }5 I
* O* [  R3 i! y. `" F9 [
    如果是这样的话，那么它就是为了提高培养基里胰岛素的浓度。这样或许可以促进细胞的增殖。7 K3 ^1 m6 ?. a3 E8 \3 k
' s" r; J8 y/ r& e/ c9 ^
     当然也可能它是有选择性的加了B27里面的一些成份，所以加了胰岛素。) D2 D7 R' B5 ~+ V$ a1 t9 l+ H! P
. I  [; \$ L1 _% B+ V% P
     多比较几篇文献，你或许就能发现规律。$ }+ F! }. F) j: z* y1 K  l# v3 ?

7 A; O  t! O$ x: m8 S: F9 ]( E1 ^     如果还有不明白的，欢迎继续讨论。

cicadacjk

如果你是按照Austin Smith他们的配方，则应该是
# s  Z7 d( ]' O9 d& y/ J0 [1/2 DMEM/F12 1/2 Neurobasal7 `/ j9 v6 q% ?) ?! q- p1 L
+0.5%N2 +1% B27
& y3 r: B( ?; x& S* L这里是他们实验室的protocol
- x* k- p9 M- i( f我自己试验用Knockout DMEM/F12养，问题也不大9 }5 n0 _1 a6 T. c' q8 e  K

- D- a4 w- E9 y6 o+ E

深海寂寞鱼

那你完全可以用他们实验室的配方。 Austin Smith的实验室的东西可信度很高。
/ n4 @$ q7 L: S- |$ S; j5 U1 Y/ `- N: k6 p
你完全用Knockout DMEM/F12应该没问题。1 d4 l; `$ |9 t3 g: R* `
+ l- I: o7 C- s5 Q: ^4 D
你注意他把N2和B27的浓度减半了。" K5 ?9 W4 Q+ Q
- I* w4 X9 @' c+ k
我觉得你就按你的方法做。只要实验结果是好的。 你发文章的时候就按你的方法写就行了。

安静的折腾

没有加bovine serum albumin fraction V吗5 f  F, V. D$ |1 e5 d! Z

weddy2009

N2B27 (200ml)  ) D1 l) Y" F3 G9 o* {
Mix 100 ml DMEM/F12,
9 P8 N" G1 U6 R* S. t100 ml Neurobasal medium, # q, O/ D" f* p
1 ml N2 stock, 2 ml B27 supplement,
. D/ n) g1 U+ {& M# g. U9 B6 v1 E: Y; F1 ml Glutamine, 200 µl β-Mercaptoethanol.  ~' H4 h( m0 |) I
我们实验室的protocol，很好用的

微笑ci

回复 weddy2009 的帖子+ P# E: ~: K+ s3 y

, [" b  G* e# r+ i5 Y. M" _5 w你好，请问这个培养基是用来养hES 的吗？我怎么觉得像神经分化用的呢？

weddy2009

回复 微笑ci 的帖子, w8 s: \& A: Y( U% t
! w4 W& n7 E" I( l/ U! z' w
楼上问的是N2B27的配方啊，我就指的是该配方，用来培养mES时的基础培养液