关于染色体核型分析如何做

qingnuanrenxin

干细胞 一般是这样的：
( d" O5 m& k6 h1 a7 m# o, ]0 ]! k  1，传代后72小时左右，加0.1-0.4ug/ml秋水仙素加到细胞培养中  培养2-4小时，消化收集，离心弃上清。 ) t7 o: S2 v3 ]! o0 v+ p
  2，0.75M低渗液（KCL）10ml   37°水浴30分钟  
, q4 B- P. z- R5 n7 z! y4 O  3，加1ml固定液 与固定  37°水浴3分钟  离心弃上清。) ?/ t3 h( j0 A  \# g) b* r$ g
  4，用8ml固定液于离心管中，吸打均匀  37°水浴20-30分钟。
$ F( N( \7 k! K1 F# H! ~; L  5，重复4 二固定  ( X* v6 _  p$ n+ X/ r" g
  6,50cm高处1-2滴细胞悬液滴于湿冷的载玻片上  自然风干。8 m1 |6 ^* y  R0 Q0 u% F0 V
  7。 百分之十 吉姆萨染液染10分钟   蒸馏水洗干  室温风干  % s% T3 c( C) G' l: v: a* G
  8，片子干后 电子显微镜观察，0.1-0.4ug/ml秋水仙素加到细胞培养液中  培养2-4小时，

qingnuanrenxin

这是别人发给我的资料  给大家共享下。

lixiaodong

谢谢。

flydayzhu

谢谢~

hawkyiger

过程太简略，还有不少错误# e1 V5 u) s% _0 A5 M
1. 中间的离心步骤都省略了，容易误解，一般为1000-1500r/min，时间8-10min
3 p: G; V/ ?% n6 Z+ `# o5 b9 X2. 核型分析低渗液浓度应为0.075M，0.75M怎么伸展膨胀。。。
# P# E7 S7 |9 t+ d' z% C3. 制片后要经过适当的老化步骤，即标本置于密闭盒中室温放置，否则G带不明显。' G! z6 ?# B0 ]* u! L/ B* l" Y; q$ d
4. 吉姆萨染色前要0.25%胰酶短暂处理，

future007

楼上说的很对，希望楼主下次注意呦

天鹅骨

请问有没有地方可以代做动物染色体核型分析的呢? 因为我要做大鼠的,一般医院里都只做人的,他们说不会看大鼠的染色体.
: q6 h. U. @: B4 h3 u5 d9 }还有,不同细胞的制片方法一样吗?

天鹅骨

再补充两个问题哦, T& A. h$ R' f' V
请问做核型分析需要的细胞量是多少呢?
5 N& d) p$ a0 s  p我上次养了瓶T75 还特意去做了细胞分选 把我的细胞和feeder细胞分开, 分到10^6细胞,觉得不少了, 拿到医院, 医院居然说要10^7 才够!10^6太少,不给我做! 那我岂不是要养10瓶T75才够?那样也太浪费了吧! 但也听有公司说2个T25就行,究竟要多少呢?
2 ^1 S% l% @/ j( g还有, 大家做iPS ES 的核型分析时, 都是怎么把干细胞与feeder分开的呢?是流式分选?还是feeder-free 培养? 我的细胞没有做过feeder-free呢^
$ F9 `; F2 T6 Y/ h3 \+ g, T: a恳请大家指教啊!# s6 P) T: u% ^. q9 Q& `& j
先谢各位了!

qingnuanrenxin

这是我问别人，别人给我的资料  我拿出来给大家分享下  如果有什么不对的地方大家指出这样才可以拿一份完整的资料，共同进步啊

qingnuanrenxin

大家踊跃发言啊