本帖最后由 加拿大STEMCELL 于 2020-4-9 10:57 编辑 , F6 o- U' F, R
- T/ a n: o+ V9 p, m人原代细胞是直接从包括血液和骨髓组织分离的细胞。这些细胞在生物过程、疾病进展和药物开发的研究中非常重要，并可应用于体外细胞实验、人源化小鼠建模及异种移植。与建立好的细胞系相比，原代细胞保留了起源组织的关键特征，更能准确地反映供者间的固有变异性，包括HLA类型和CMV状态。使用原代细胞提高了细胞培养系统的生理相关性，得到的实验结果更具有体内预测价值。 3 S# B( Y; M! L
5 F2 l* A6 P! Q9 k, }凭借在细胞分离和细胞培养试剂开发方面20多年的专业知识，STEMCELL Technologies旨在支持您研究工作流程的每个阶段。现在我们已经准备好了，为您提供多种从脐带血和外周血中分离的冻存人原代细胞！ 可提供的细胞类型（健康/正常供者）, D- J3 {$ ^1 X( G
单个核细胞（标准、具表征） 纯化的细胞亚群，包括：
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CD34+细胞 T细胞 自然杀伤性（NK）细胞 B细胞 单核细胞 其它细胞类型 具体产品信息请点击这里查看。# C. n6 q& f0 Y2 r0 [
" N- v9 A' B- ]' A实验成败，始于这关键的第一步
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+ f4 h6 P" I+ p4 v高品质 - 高复苏率、高活率- 如果产品说明书标示原代细胞数量为1 x 10^8 cells，按照产品说明书操作即可复苏得到1 x 10^8 cells。
- 所有的原代细胞都通过EasySep™无柱免疫磁珠细胞分选技术进行分离，并冻存在CryoStor® CS10中，以保证细胞活性。
- 我们对细胞的冷链运输过程进行全程的温度监控，并提供全程温度监控的记录，确保细胞品质。; m0 l8 y8 A: j0 U, Y9 ]9 p
, Z0 V% h+ I5 b/ b合规 - 可提供您所需的文件 所有人原代细胞产品均在具有知情同意书（ICF）及食品和药物管理局（FDA）或机构审查委员会（IRB）批准的方案进行采购，确保个人信息和供者匿名保护。捐赠在美国进行，并依据适用的联邦、州和地方法律、法规和指南。供者的一般健康状况和病毒状态，包括HIV-1、HIV-2 、乙型肝炎和丙型肝炎均有经过预先筛查。可根据要求提供额外的筛选或分析。我们的质量保证、质量控制和法规事务部门随时准备为您提供必要的文件，以满足特定的机构要求，包括供应商批准，以便于采购。
, p g2 `. A: d* j' w4 a此外，细胞附带有质控的分析结果证书，包括细胞计数、活率和纯度。STEMCELL的质量管理体系已通过ISO 13485医疗器械认证。
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. L, h f G2 }7 x5 C- k灵活 - 提前测试并为您保留批次 在使用人体生物材料时，供者或样本收集之间存在差异是正常现象。实验开始前，您可通过预订整个同一批次的冻存细胞，并对该批次进行测试，以减少预筛选不同批次的细胞所耗费的时间及精力。此过程可确保您使用首选细胞批次进行下一次实验，而无需再次进行预筛选。
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技术支持 - 即时，可上门demo您收到细胞后，需要任何的技术指导，如化冻、复苏等，我们均可提供上门服务，以保证您可获得最高质量的细胞。此外，STEMCELL也提供专业的细胞培养及细胞分选技术，以支持您更好地开展下游细胞研究。( B' C' j/ l, ^+ W) O; {
: S( Q: Z: `, l1 x个性化 - 定制您的筛选条件STEMCELL可根据您的要求进行个性化定制，用于非标准细胞类型或进行具有特定要求的采集。我们能够定制满足您特定研究需求的产品：可定制细胞类型、规格和样本量 : O! ^, Z/ n* w% x: q
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实验数据* Y* Q7 J" i" ^
图1. 冻存的Pan-T细胞在激活后分泌IL-2 通过EasySep™人T细胞分选试剂盒（产品号 #17951）从白细胞单采术样本中分离的新鲜T细胞或者冻存的Pan-T细胞（产品号 #70024）在ImmunoCult™-XF T细胞扩增培养基（产品号 #10981）中培养。细胞分别在添加或不添加ImmunoCult™人CD3/CD28 T细胞激活剂（产品号 #10971）的情况下培养48小时后，使用人IL-2 ELISA试剂盒（产品号 #02006）对不同条件下细胞分泌IL-2的水平进行检测。结果表明新鲜分离和冻存的纯化T细胞在活化后分泌相似水平的IL-2。 *对照组的IL-2浓度低于检测最低极限值。
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图2. 冻存的单核细胞分化成树突状细胞并在激活后分泌IL-12（p70）和IL-23
, |( |* a3 a' U 通过EasySep™人单核细胞分选试剂盒（产品号 #19359）从白细胞单采样本中分离新鲜的单核细胞或使用冻存的单核细胞（产品号 #70034）在含有10％FBS、0.1mM MEM非必需氨基酸溶液（100X，产品号 #07600）、2mM
5 @% ~' |5 c6 Y7 B8 I! w' SL-谷氨酰胺（产品号 #07100）、1mM丙酮酸钠和50μM β巯基乙醇的RPMI 1640培养基（产品号 #36750）中培养6天。在第1、3和6天加入人重组细胞因子IL-4（产品号 #78045）和人重组细胞因子GM-CSF（产品号 #78015），将单核细胞分化成树突状细胞。将细胞保持未激活状态（对照）或者用LPS和人重组细胞因子IFN-γ（产品号 #78020）进行激活。分别使用人IL-12（p70）ELISA试剂盒（产品号 #02014）和IL-23 ELISA试剂盒（产品号 #02016）对单核细胞分泌的IL-12和IL-23进行检测。结果表明，激活的单核细胞分泌（A）IL-12（p70）和（B）IL-23，而未激活的对照组中未检测到IL-12和IL-23。 *对照组的细胞因子浓度低于检测最低极限值。 i6 H1 }2 d: |( k
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图3. 冻存的B细胞具有高活率并且在刺激后产生IgG抗体 （A）在CryoStor® CS10（产品号 #07930）中冻存的B细胞（产品号 #70023）在解冻后具有高活率（平均值 = 96.3 ± 0.6％，n = 6）。（B）将B细胞在含有10％FBS、2mM! J7 @, y+ ?$ d0 {( L- A
L-谷氨酰胺（产品号 #07100）、10mM/ k0 D: m0 G1 K% P9 B9 `
HEPES（产品号 #07200）和55μM β-巯基乙醇的RPMI, F, i6 o) c3 D% u
1640培养基（产品号 #36750）中培养1周。在此期间，细胞保持未激活状态（对照）或在具有IL-21的条件下使用CD40对细胞进行激活，随后通过ELISA检测IgG抗体的产量。结果显示，相对于未被刺激的细胞，激活的B细胞可显著产生更多的IgG抗体。
/ }$ s4 Y. t5 E8 F原代细胞复苏窍门
$ y: y* |3 o9 c* ?! M当样本被反复冻融时，有时会呈现“团块状”。这是因为外界压力加速细胞死亡，从死细胞中释放出来的“粘性”DNA分子将邻近的细胞粘合在一起，从而产生了细胞团块。
3 H1 C4 A* I/ ?9 k; ?在样本中加入脱氧核糖核酸内切酶 I（DNase I）可以减少DNA悬浮碎片和细胞团块。现今有许多使用DNase I以减少细胞团块的有效操作方法。我们推荐在细胞悬液中加入DNase I溶液（产品号 #07900）至终浓度为0.1 mg/mL（或200 Kunitz units/mL），并在室温孵育15分钟之后进行下游应用。
0 k/ t; A: G# t- R9 e5 i下面复苏冷冻样本的方法描述了使用DNase I减少细胞团块的操作步骤：1. 在37°C水浴中快速旋转冻存管。将解冻的细胞转入一个灭菌过的50mL圆锥管。可选择：在圆锥管中加入0.25到0.5 mL初浓度为1 mg/mL DNase I溶液，然后再将解冻的细胞转入管中。2. 用1 mL含10% FBS的培养基或缓冲液（例如PBS或者HBSS）冲洗冻存管，以收集管中残留的细胞，然后将培养基或缓冲液转移到新的试管中。 3. 缓慢逐滴加入10-15 mL的含10% FBS的培养基或缓冲液，同时缓慢摇动试管混匀。 4. 用含10% FBS的培养基或缓冲液补满50 mL试管。 5. 室温离心，300 x g；10分钟后收集细胞。6. 小心地弃去尽可能多的上清液，尽量不要搅动细胞沉淀。轻轻敲打管壁来重新悬浮沉淀。 7. 如果细胞悬液看上去混浊，计算达到终浓度为0.1 mg/mL所需的DNase I，逐滴加入DNase I并同时缓慢摇动试管混匀。在室温下孵育15分钟。 8. 加入25 mL含2% FBS的培养基或缓冲液，轻轻倒置试管混匀然后离心（转速和时间与上面的步骤相同）。弃去尽可能多的上清液然后重新温和地悬浮沉淀。 9. 如果细胞悬液看上去仍然混浊，使用一个30-70 μm的细胞滤网过滤样本并移入新的试管中。使用含2% FBS的培养基或缓冲液洗涤试管，然后使用细胞滤网过滤，重复三次。 10. 得到的细胞悬液可以进行细胞计数和之后的下游应用，例如细胞分选。请注意：如果是对DNase比较敏感的下游应用（例如造血细胞集落检测），进行细胞计数前再使用适当的检测缓冲液洗涤细胞一次。7 L4 W5 p, l7 r0 k6 b. I. j0 B
若您有任何关于人原代细胞的问题，请直接通过400-885-9050与我们联系！) i: H. \* D7 l+ Y4 @! q
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发表于 2020-4-7 18:04
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