胚胎干细胞的饲养层细胞处理问题

ahfjwangrui

各位专家，在制备胚胎干细胞的滋养层细胞时，有人用过丝裂霉素处理滋养层细胞？这个具体怎么处理？多谢！

大猪小猪落玉盘

按照自己实验习惯，配好丝裂霉素，处理一定时间就行了，至于一些数据，根据自己摸索的条件也好，参考资料也好，不是很难。多看文献！！！

zhanglixin522

将待做饲养层的细胞培养至指数生长期，然后在细胞上清中添加丝裂霉素至推荐的工作浓度，37度培养箱中孵育2h左右（时间记得不大清楚了）然后弃上清，清洗细胞几次，就可以作为饲养层细胞使用了。

czzhaozhu

丝裂霉素的工作浓度一般是10ug/ml，作用2-3.h，用PBS多洗几次。

Jonathan

用丝裂霉素加到培养基里面，处理2-3小时后，用PBS洗。洗的方法通常是洗4-5次，但是这样可能会有部分细胞损失。减少损失的方法是洗一次后，用胰酶消化下来，然后离心，然后再用pbs重悬，再洗。这样的方法，缺点是对细胞可能损伤大一点点。（但是我这样做过，也没发现饲养层细胞不好用）

zpzp0312

一定要多洗涤

ellapan

建议参阅 上传的“干细胞培养全攻略 ”里面有详细步骤

炉太黑

回复 5# Jonathan
8 P, J' @& J8 j. {7 f. q我不敢洗，我处理后经常发现饲养层会发生脱落，这是怎么回事捏

炉太黑

建议参阅 上传的“干细胞培养全攻略 ”里面有详细步骤
: H; K% `) ?# S% Zellapan 发表于 2010-3-8 18:01

; M# h0 e- ^! `
亚哈，真会做宣传

上海过客

回复 8# 炉太黑
5 Y7 l# |) F$ V9 H
. j7 R* j! \6 O8 @9 |; C( T+ c- n7 |" C
饲养层 细胞  铺的 时侯需要 添加 明胶  。  怎家 贴附能力 。
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丝裂霉素 处理了以后 ，MEF 贴壁 能力 下降了  ，一洗就会 掉。
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/ \: l' `+ j7 C' |  v+ T7 w洗的时候 要轻微 ，不能直接打在 细胞上。