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泡沫清风

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: s* U. c3 o% C  `# x3 I- x2 F0 ?建议和问题都堆到这边来 ！这样便于查找和回答! U, [# _  b; h, ?6 p0 A8 a
# o1 g' y7 l% w% `7 ]- s
我先说一点：培养过程中，我没提到换液，说明就没有换液！一般细胞种上后我就放在那里不怎么去管他，等他长满了消化8 t0 h( i2 B) M
因为有人问我这个问题，所以我先回答下，呵呵！

泡沫清风

* a* W4 \: G' t! l: @1 m# V' P3 ]4 W- z
have-a-rest 的问题：
) n; M% U5 x' k# [( M3 s+ r1、我们的培养基买的是GIBCO的粉末，含丙酮酸钠
7 Q, M1 N2 u& T! a( K  b+ I- }2、双抗加不加依个人习惯，我培养不会污染，所以就不加了！而且包装病毒和感染的时候最好不要加双抗
  G, J3 [9 X% w3、我们以前也用过胰酶+EDTA，感觉太强烈，不利于细胞下次贴壁，293T细胞本来就是贴壁不牢的细胞系，0.25%的胰酶消化已经够快了，有些protocol还建议用0.05%的胰酶。还有专家建议胰酶都不用，直接吹就行，我们也试过，吹完了细胞碎片很多，背景很脏。吹打时间长是因为293T比较粘连，容易抱团，充分吹打成单细胞！

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7 N/ T4 a- d& _; \3 `  i( ?

, q) U: T+ _( r+ W3 Ahualin840518 的问题：- d% _' ?! i! [0 _$ O- c1 i
nikon的荧光显微镜自带的成像系统

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' U2 p6 D. K- h! I  Z" j6 h, J' G6 c( a0 B; h  s( r
mvirus008 的问题：
! B; n3 E; e3 h& H/ x5 ~: N可以不离心，确实也有人这么做，虽然是中和了，但是仍有残留，我觉得不好！
6 O; g1 T9 w# k! u: r$ S9 U而且不离心细胞碎片可能会多，背景比较脏
! C: ]! P8 O7 c6 j( c2 [" o+ p美国那边的老师都推荐离心。

泡沫清风

难得胡涂-1的问题
" g- C6 O$ Z( f8 Y293T贴壁本身就不牢固，你很难把握，稍微消化一会细胞就起来了！倒胰酶，容易倒掉细胞

gemstone

建议将0.25%的胰酶用PBS稀释1：4，然后对细胞的损伤会小很多，这个细胞很容易消化。转染也要特别小心，不小心就会漂的。

泡沫清风

6# gemstone
7 `2 ~; u/ x/ ^% a$ K3 x
7 g$ o% o' m" @' H0 ~) q) n呵呵，我上面说了，也可以用0.05%的胰酶！( A4 g1 Y( I" M1 F" }8 x6 l
转染我后面会说的，我铺了poly-L-lysine,所以不太会飘。而且就算不铺poly-L-lysine，我们的细胞还是比较牢固的，细胞比较好

wangming

比较过铺明胶和poly-L-lysine的效果吗？我用的是明胶，经常出现很多白色颗粒。

泡沫清风

8# wangming
/ ]8 Q" G9 M$ A. \) n0 F我没有用过GELATIN，GELATIN一般都是在培养ES时用于铺Feeder的吧。

sajia

我想问一个巨弱的问题：第一天和第二天的图片上黄色的圆圈是啥啊？还有怎么判断宝宝长的好呢？光看触角么？