细胞复苏有哪些地方需要注意呢，为什么我复苏的细胞死了那么多

爱学习的青年

细胞复苏需要特别注意哪些方面，每次复苏的细胞离心之后看着挺多，第二天看贴壁的不多，并且贴壁的细胞形态也不好

wuhuaguo88l

当天复苏可留少许细胞，测一下活率，若活率不高，分析一下是否当天操作不当或是细胞冻存就有问题；若是活率还行，是不是细胞培养有问题，诸如此类，多分析分析应该能找到原因。

爱学习的青年

回复 wuhuaguo88l 的帖子8 V* X3 F: h8 M

" s: `0 h& I3 a! v4 \& j' o0 O4 J唉，死细胞太多太打击信心了，复苏后要长到冻存前的数量真是有点难

death0270

间充质干细胞么？这个细胞相对来说还是比较皮实的，如果有问题，主要的几个点在冻存方法、冻存液配方、以及复苏过程上，你大概介绍下这些步骤才能帮你分析。

cuijiaoyan

细胞从液氮罐拿出来，迅速进行37度解冻复苏，速度要快，DMSO毒性大，速度慢的话很容易造成细胞活率低。其他的你需要说下你具体复苏的步骤，才能帮你分析。

rzghc

先准备好水浴锅，复苏的时候用冰盐水，不要等细胞全融化，稍微有点冰晶的时候就可以操作了，操作过程中基本就完全融化了。

剡溪兰客

准备工作做好，复苏动作要快，DMSO在温度较高的时候对细胞毒性较大，所以复苏过程中当管子里融化到大概黄豆大小的时候停止水浴，用冰盐水洗涤

gsg040222

细胞复苏死亡率较高不是简单的因为复苏的问题，还应当考虑冻存液，冻存方式，贴壁细胞的消化方式，以及最后的复苏，我的建议是楼上大家给的复苏方式可以借鉴，然后变量考虑其他因素，最后确定一个较好的全过程

yanxm920

细胞复苏的注意事项一般包括以下几点：
2 t: M9 r$ N# S" a1.复温时，速度要快，从液氮拿出后迅速转入37-40度的水浴锅中；
: ^7 J1 ~5 Q: f  Q; ^4 [/ P2.冻存管内没有冰晶时，转入生物安全柜，用预先准备的30Ml PBS洗涤，去除冻存液；# x/ I- o6 @: t- h/ m
3.细胞死亡较多要考虑一下，冻存液和细胞数量，特别是细胞数量，数量太多复苏出来会死很多，这是由亲身体会的！

爱学习的青年

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复苏步骤：取出冻存管，37度水浴，还一直晃，加快冰的溶解，然后转入安全柜，把细胞液转入离心管，缓慢滴加生理盐水，边滴加边摇晃离心管，生理盐水加入量差不多了，开始离心，离心之后用培养基重悬，就开始培养了。