请教干细胞传代是用胰酶消化和细胞刮哪种方法更有利于细胞生长

风倾颜

用胰酶消化吧，胰酶用之前最好37度预热一下，消化的时候37度消化30s到1min一般就可以了，比较难消化的细胞时间可以稍微长一点，尽量不要超过2min，消化过度会对细胞造成损伤

abc2613130

我们都是用胰酶消化的，事先将胰酶预热到37度左右，有利于消化完全。

splinkerette

回复 Jiangshi90 的帖子- l& }% u6 c& X. Q& P( h

+ G- _# [6 [; G' |3 I9 k, }9 ^! u具体的原理也没深究过，只是protocol上都说的是有蛋白酶和胶原酶活性。附一个网上最常见的说明：! m3 U% q; U' z. E) s; ^
Accutase是包含有蛋白水解酶和胶原酶活性的一种细胞消化液，是胰酶/EDTA消化液的完美替换产品，用于从常规组织培养器皿和粘附培养器皿中消化细胞。适用于组织解离和细胞分离，因分离后的细胞能保持完好的表面抗原，且不含任何动物动物或者细菌来源组分，可满足对后续如细胞表面标记、病毒生长分析、流式细胞分析以及生物反应器相关检测等多种实验的要求。与传统的胰酶消化液相比，本品具有以下优势：1）适用于绝大多数原代细胞和哺乳动物细胞系的消化，以及昆虫细胞；2）温和有效的消化干细胞（hESCs和mESCs），冻存后细胞具更高复苏率；3）几分钟内实现粘附细胞的分离，不需清洗或中和反应，节省细胞传代时间；4）对细胞消化较为温和，能增加细胞产量和存活率；增强细胞贴壁效率；改善细胞形态和细胞生长特性等。

bubble_w

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- ?; e# j6 }! w8 i' _6 t
+ F; b& `8 Y; p2 \+ b你指的是小鼠的胚胎干细胞吧？如果是人的胚胎干细胞是不能用胰酶消化传代的，可以用细胞刮传代。如果是小鼠的胚胎干细胞或者iPS细胞，推荐用胰酶传代，尽量吹打成单细胞。如果使用细胞刮，可能会出现大的细胞团块，对干细胞的增殖有影响，并且容易出现分化。

sfnana

用37℃，0.125%的胰酶消化，1分钟左右，镜下观察（这是最重要的），及时中止消化。细胞刮对细胞的伤害特别大，不推荐使用。

LVXUEYAN1101

我用的是GIBCO家的细胞消化液，专门用于贴壁细胞消化，要比胰酶温和的多，还有CTS级别的

UlissesJR

用胰酶啊，怎么舍得用细胞刮对细胞伤害太大！！

修行

酶消化吧，不过现在有了不用终止的消化酶，不用像原来那么麻烦了。

edwardellen

要是贴壁的细胞，当然还是要消化的好，; ^9 G" B* ?% f( P% L
Hyclone有一款胰酶替代品，价格和普通胰酶差不多，就是作用时间较长一点，
0 @+ @  C4 s5 P& L* J无血清培养条件也可以用，不用加大豆蛋白抑制剂什么的，
/ ?6 X- G( ~" H; r5 I. X1 A要是成球的胚胎干啥的，还是要用胶原酶比较好，9 f% l5 X; m+ g( \
我是没听说谁用刮刀的，好像就是做免疫细胞治疗的有人用那个