大鼠骨髓MSC为什么只那么少

yiwuya007

用4周左右雄性SD大鼠，四肢骨髓冲洗，最近几次做下来，只能种在6孔板的1-2个孔，以前做可以种2-3个100mm的大皿，实在想不出来为什么。冲洗时间太久，细胞死了？双抗的原因？大鼠太小了，骨髓少？: [6 T7 Q! @/ D/ I
请大家支招，哪里出了问题？

lgfffancy

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# H3 p+ D0 j; g其他都有可能，唯一大鼠太小了，骨髓少，这个我不太赞成。如果大鼠是健康的，这个年龄的大鼠骨髓不应该太少。

pengxuleo

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( B* i( r5 j* r# r6 p  T
首先，4肢是没有必要的...前肢试验过几次了，都不成功...后肢就足够了1 ~, n1 {6 b4 I7 n& E2 r
其次，4周龄大鼠的BMSC分离，差不多1只大鼠，1-2个10cm皿，没有问题的/ Z8 P# Y# [  _& \
问题，可能是培养基和血清什么的...是不是最近换过，或者分离过程中消毒时间太久了，细胞活性下降了...

yiwuya007

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& }% ]0 ^5 _8 `' T; ]/ f$ r0 T因为没多少贴壁细胞，培养基换了几种，血清用了gibco和hyclone，都这样
% y$ I! h. P; y: Z- N1 Y' I消毒，就是整只动物在酒精中泡5-10分钟，分出四肢，PBS洗了很多次

pengxuleo

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! [/ L" b2 s" Y4 E* a, J# ]% x! S培养基和血清 都用hyclone 的吧，我们实验室用的这个，还是挺好的

firstaider

用后肢吧，不可能少的