大家帮忙看下人源MSC的状态吧。谢谢

michael1013

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5 D" b! o2 r8 o+ z2 v4 r6 F. U
& c4 M0 g0 ]9 t1 ]的确在传代后第2天仍然有大量浮游的细胞，并且我用台盼蓝检测过，几乎都是死细胞。并且但是传代时用的是10cm的dish。粘附的细胞密度的确比较低。
1 M8 ~: l3 H# `+ w) t% i9 b是不是换6cm的会好一些

michael1013

回复 zttamy 的帖子" C: L2 B9 M. O
6 _8 K% n; ~/ b/ C
换液是隔天一换

sailree

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7 \, b6 L* S, j* I  u
% M/ o6 }4 H5 y  ^9 q血清的话试下DMEM+F12+10%FBS,密度8000~12000不过传到后面依然会出现细胞老化的情况

michael1013

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3 A2 f6 N6 g. T. \/ U7 T: X4 ~2 ^! n: W+ {- n; n
多谢多谢！% \1 \( p2 Z: Q" M7 M$ m  v9 z2 y
是不是说单用lonza的这个培养液就可以了，不用往培养液里添加别的什么东西吗？- |8 ^0 }( {" s/ W: |
还有就是接种之前用不用铺gelatin什么的。还是直接就铺就可以

kyo000

貌似接种密度太低的话细胞就容易出现老化，跟代数高低没啥关系吧。。。
4 p) b9 Y* q: \. P& v3 G( ~不过一直用的是低糖的DMEM加胎牛血清，还真没用过无血清培养基，不知道养的怎么样。。。

zttamy

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6 x# ?. I7 F! t" ]
3 e' ?7 e( q- o! J跟代次还是有关系的，文献研究显示越往后传老化现象越明显

sailree

回复 michael1013 的帖子, Q" d; P# @  ]* r2 q9 s) d2 [
! K- L5 z  b9 d- i
直接用哈

caiyu07248

你复苏细胞的密度是多少？应该是密度太低了吧，复苏后9天了，细胞还那么稀，细胞太稀了也比较容易老化，建议复苏时的细胞密度最好比传代时密度高10%！

michael1013

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1 W7 ^; R9 K- G3 Q5 P3 ~
9 U3 P) Y: w8 O1 M复苏时候的细胞数是30000（10cm dish），但是有大量死细胞。估计有大概40%吧。
- c( u5 n' X# M, T* B还有就是，因为这是从别人那拿的stock。刚问了一下，说是2年前的stock，并且一直在-80度保存。不知道这会不会有影响。
8 v: ]# D8 w# p谢谢

zttamy

回复 michael1013 的帖子2 Q' F2 s/ u1 Y* M5 _. P9 k
/ [3 b3 l! r6 m# b! U; d
-80℃都放两年啦？活性肯定有问题，液氮里放2年都难说