胎盘间充干的产量有多少？谢谢

willow0711

做了几次，胎盘小叶分离间充干细胞，总是存在两个问题，污染和产量低。! A* u5 p; V9 @0 }6 P
1、之前发贴请教各位大侠，我用含4种抗生素的PBS清洗，也用75%的酒精反复洗了3次，但是没什么改善，还是细菌污染了，无奈啊！不知道哪位做过的大侠可以分享下自己的经验呢？2 D+ {& u5 W) C; [
2、还有个问题就是产量极其低，想问下有经验的大侠，你们分离的时候，一般分离多少克？得到的细胞可以铺几个25T培养瓶？或是几个孔板的孔？谢谢了！

sdudai

同楼主，我也想问一下各位大侠，怎么避免污染问题，我做的胎盘小叶分离间充干细胞也是经常污染。

uslzhang

回复 willow0711 的帖子/ s8 f4 [% l: ?. ~" R! z
& R7 W, W! J: w! a4 ^
楼主不是存在什么理论问题，而是操作过程的技术存在问题，建议练好手艺，严格操作，去其它实验室观摩别人成功的操作规范程度。

willow0711

回复 uslzhang 的帖子3 S9 p9 O* q! d- l. W6 r  W7 V# N) @

% |# Q5 Y' i. H( A0 `; H* A哦，只是没有这样的实验室可以去观摩啊

cantonchn

  u; Q. t9 Z- }/ I

% C! Y' o4 _7 S9 o胎盘提取MSC污染几率很大，远不如脐带。( }$ M. m: B+ J- Y
! h- L3 L, x& t" M" \
并且胎盘中含有大量的前体MSC（即MSC的未成熟状态），这个东西个别公司称之为“亚全能干细胞”，目前尚无证据表明此干细胞与MSC有何本质的区别~~~

piano尤尤

所获取的胎盘本身来源的污染 这一点一定要尽量避免 如果开始就是无菌操作 那后续就基本不会有太大的问题
' M" v0 V, _3 V  p  G7 l" G- K/ D& S运输过程不要太长 取到标本后 封口运输
! s5 c9 m: G7 ?' g7 K. L我所做的胎盘基本上是从产妇生产到实验室就一个小时* x4 O! Z* X7 {  F$ p7 ]5 p
清洗就只用双抗 没有用过酒精/ F& z. J$ j8 p; Y
做了几十次 就一次污染% t5 z5 l# R) ~. N
关于产量的话 你可以试试第一次消化贴壁的细胞的培养基 可以再次离心贴壁 7 e* |  s/ _+ m

单个核细胞

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- s5 z, L4 c( q& E8 P; P' y  ]) h, k6 w0 S
胎盘放在加有双抗的采集液里，分离的时候剪取5-10ml，漂洗去除血凝块，剪碎后加入酶消化，过滤去除未消化的小块，滤液用Ficoll分离取白膜，洗涤白膜后接种培养。5ml胎盘小叶处理后所得原代细胞应该可以接种一个T25瓶。+ X% L, f: R3 O4 O- y" J

6 L2 Y3 Y5 p2 w0 h% A: V9 @; o注意几点：
6 l1 W" O/ `) m' C9 r7 w: L+ c% X1.盛放胎盘的器具应首先做到无菌；+ J# S( t: k$ t! ^1 C1 i4 i
2.采集液加入抗生素；
# ]- f$ s# L& f( _  W: i* i3.分离操作所需的手术器械、一次性耗材、试剂均应保证无菌；
& v9 ^/ \) m1 Y& `/ _4.建议使用一次性细胞筛网；
3 o2 B2 n) [; ~3 c# I: n5.注意无菌操作。

willow0711

回复 piano尤尤 的帖子+ R! c2 z/ U- c9 I: R8 d

5 U4 ?$ T7 B9 V$ |% ~7 y哦，谢谢
! g1 o- J5 Q, H. x6 v- x. B7 J每次都是人家装到袋子里面后给我们，不允许我们把无菌器皿带进产房！

willow0711

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$ G8 i7 d9 s" u; s, z& X3 H' I* W6 j/ d0 @- C
恩，谢谢

cantonchn

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+ `6 v6 k- w8 a2 x
! I8 C4 ]! h7 Z& T' T那污染的可能性就大了~~
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