精原干细胞建系交流--发现培养液变黄，细胞逐渐死亡

20111109

问：各位大侠们，最近遇到问题，我现在做小鼠精原干细胞体外建系，发现到F3代培养液变黄，细胞不见生长，再传代的细胞状态很差，贴壁性不好，逐渐就像枯掉一样，换液就几乎没有sscL .
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, l) A5 V4 n. X( ]请问这里有好心的亲们能帮我分析一下原因么，万分感谢呢。

奋斗的时光

有没有可能是分化了，或者培养基中的某些养分刺激了精原干细胞的凋亡？
% G3 \% o0 O) c7 P: o1 M$ F精原干细胞的培养基成分是个很重要的因素。* F' G1 h' @/ h
但是如果照你所说，贴壁都不怎么好，吸出来都不剩啥了的话，这个细胞状态就太差了。' b; d. ~" V) }8 C& X& U
也建议重新分离把。

saifast00

回复 20111109 的帖子" `, o2 p$ M( M. ], C
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细菌真菌污染都会变浑浊变黄，还有变黄主要是因为培养基PH变酸，看看你的孵育箱CO2是不是偏高？

20111109

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是么？ 那请问培养液隔夜变黄有哪些原因呢？我都快崩溃了 ，找不到原因，细胞就一直死下去了。

w343989328

回复 saifast00 的帖子6 ?1 D7 @7 C, X+ I

2 \! }8 j- H8 U0 w会变黄变得很快啊，因为营养被抢夺啊

saifast00

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* t  [! f- o% v. T
支原体感染培养基是不会有明显改变的吧？？

w343989328

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& U0 ]5 G7 ^" Q+ E: o2 i  B嗯 做个支原体检测吧  就个PCR而已

20111109

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' A1 R' n1 j! q. j4 n+ F: t: g7 U我的细胞最先出现的是不分裂，细胞散在存在，几天以后有部分细胞会飘起来，在培养空的中间液体中悬浮着很多细小的细胞，换液之后，细胞就越来越少，最后细胞就像崩解了一样，我也不清楚是不是支原体，培养液是会变黄的。

w343989328

支原体主要两个来源，一个是血清，一个是动物本身，即使是SPF级也很难避免。我们之前分离耳朵的纤维细胞一直出现支原体，SSCs还好，所以我猜，你可能在分离细胞过程中被支原体污染了。支原体一般不会直接导致细胞死亡，只是和细胞争夺养分，导致细胞状态逐渐变差，是一个比较慢性的过程。而且，细胞培养基迅速变黄，是支原体污染一个特征。

20111109

回复 w343989328 的帖子! @* x" n1 {8 N: [/ h5 k& u) Q: N. n
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我不理解 你的意思是支原体来源于小鼠 可是我的细胞从建系到F3代时间有20多天了 这段时间支原体是一直在潜伏状态么？