脐血来源的单个核细胞诱导CIK，细胞增殖缓慢，什么原因呢？

mengnancy

脐血来源的单个核细胞诱导CIK，细胞增殖缓慢，什么原因呢？用淋巴细胞分离液分离单个核细胞时，没有出现明显的淋巴细胞层，而是与分离液混在一起，分离液对细胞有损伤吗？

chenguangyu

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/ a4 H2 e; k! m2 a, k- I1000uIL-2是不是有点高？觉得用不到那么高吧

lyj-0017

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) h+ Z/ H+ ?+ I% v: U. k9 {1 @
3 R& m% q; O; o4 E) W/ }      我认为应该不是血小板和红细胞的问题。用淋巴细胞分离液分细胞后，细胞经过几次清洗，血小板应该所剩无几；至于红细胞，到现在为止，我没发现对培养的CIK细胞有什么不利的影响。
3 d2 F% A0 S0 w# a6 E% o    你说的沉淀5分钟是啥意思，能具体讲一下吗？如果出现絮状物，这不是说明细胞已经死掉了吗？这些絮状物不也就会粘连细胞吗？

wjp130

回复 lyj-0017 的帖子$ Q$ g# S) ]7 K6 T
/ E! z  Z" C3 X4 A8 x0 \
很少用外周血培养，关于絮状物，我分析了一下，外周血培养CIK，可能是单采血中的血小板过多，导致的细胞聚集，或者是红细胞裂解后的碎片，现在我已经基本解决，其实絮状物多也没什么，及时处理，我一般是采用沉淀五分钟的办法解决。

lyj-0017

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% v) R8 `: p$ A! {5 P我们养的是外周血CIK，现在在培养过程中也发现培养初期细胞长得挺不错的，也是到了5-7天时出现小絮状物，细胞增殖变慢。请问你们现在解决这个问题了吗？是什么原因呢?多谢了

mengnancy

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0 A2 e  Q* y- N8 u0 l+ B
/ q, L4 L5 z/ A. {; B请问哪里能买到白蛋白，非常感谢。

realff

对你的第一个问题，我也怀疑你的离心效果不好，可能没有关注升速和降速的控制。同样是800g，如果用最快速度降速和缓慢降速，分层的效果差别明显哦。你没观察到清析的条带，吸取的细胞少，那么很可能会导致长不起来的。

细胞海洋

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0 J1 u' s7 [" v7 G) \, G, |% T, B3 p: s; P0 U2 K) g; J2 `
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wjp130

回复 大少爷 的帖子0 r- y0 d5 ]( Q

. G/ q) ~& ^2 ?, \  }5 W请教，最近用脐血养CIK，开始都增殖很好，到8天左右时候，会出现小的絮状物，细胞增殖也变缓慢，甚至停止增殖，不知道是什么原因，我加的是脐血血浆，每天全量补充TL-2，请教了，谢谢

jiefengbing

在分离单核细胞时应当注意离心机的升速跟降速，并且最好用水平转头，你所说的没有分层，是否有这方面的原因所影响？一般来说，ficoll离心液应该问题不大。在从离心机取离心管的过程中，注意不要晃动。
2 Y2 Y/ Z9 s) {8 ~3 r另外细胞增殖缓慢，可能跟培养体系有关系.takara的那种培养液培养CIK不太好，要是非要用那种培养液，应当加自体血清或者2%的白蛋白，下次你可以试试看。