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小鼠骨髓移植整理 的 protocol 求 雅正
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作者:
hyde
时间:
2014-6-23 21:48
标题:
小鼠骨髓移植整理 的 protocol 求 雅正
刚开始以为这个区是技术讨论区,后来感觉像文献交流区哈…
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准备练习一下小鼠骨髓移植, 整理了一下protocol ,不知道可行性如何 ?
protocol 整理.zip
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2014-6-23 21:47 上传
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作者:
hyde
时间:
2014-6-23 21:57
求实战者指导改正
$ n6 q8 s- j6 G7 N( q F
作者:
goblinwang
时间:
2014-6-24 12:53
一只老鼠可以得到10X7的细胞,受体只需要2-10X10X5就行了,C57小黑鼠做尾静脉,难度大,手法需要练习,注射器最好不要用1ML的,针头太细,冲骨髓的时候,容易产生机械损伤,致死剂量照射,未处理的话,一周开始死亡,我是一次性照射10Gy,照射的时候最好密封无菌处理
作者:
hyde
时间:
2014-6-24 14:39
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goblinwang
的帖子
1 {- n3 u* O9 k, Q6 v
1 Q+ v; r! n" N+ i; `/ A5 j
如果分离的细胞不进行流式分选出干细胞也只需要这么少细胞吗?
作者:
hyde
时间:
2014-6-24 15:46
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goblinwang
的帖子
8 X6 F5 x& g9 p% C
# G: k9 K- x& O4 t8 W3 p& T
小鼠的性别有关系吗
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作者:
sysuhoo
时间:
2014-6-25 11:21
按照我们实验室的经验,Co60照射与你的实验目的有很大的相关性,看你是做半致死还是致死,而且更重要的是剂量没有定论,一般来说体重和周龄对于照射剂量非常重要,我们的经验是20g左右,8周龄选用8.5Gy比较好。最后的成功标志以嵌合率在85%以上为成功。
# ?' D! Y; s- [8 ]4 B
另外小鼠的性别对实验的影响不大。
作者:
hyde
时间:
2014-6-25 14:01
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sysuhoo
的帖子
. Z& e' e9 C" a( j8 n* l5 k
7 c1 H4 B# g, {2 [% t ~+ M
嵌合率如何判断?取细胞做流式分析?
作者:
goblinwang
时间:
2014-6-25 15:42
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hyde
的帖子
, t( t# Y8 B# M& R/ r( j% M" T$ S2 p) J
/ _9 ^# J) p ^& u, I% J# w* j
按理论看,每10X5个BMcell就含有一个HSC,而一个HSC就足够重建整个造血系统了,性别最好一致,不过获得的细胞含量,没差异,受体鼠,最好用公鼠,至于嵌合率,那你是用CD45.1和CD45.2老鼠进行BMT,这样也只能流式了
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作者:
hyde
时间:
2014-6-25 19:07
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goblinwang
的帖子
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1,关于抗生素,国内外环境不一样,国内一般用的比较重的药物是吧,有什么推荐的?有文献说ph水太酸小鼠会不太喝。 需要每天换饲料换水吗?
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2,有的文献说分离骨髓细胞的缓冲液不能加FBS,有些又可以,(最后重悬的不能有血清可以理解)-------我的理解是开始分离的时候可以有,后面快注射前的几步清洗就要去掉,防止对小鼠的影响?
作者:
goblinwang
时间:
2014-6-30 12:12
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hyde
的帖子
3 N; G$ \& V+ \. W
, i0 w h* N/ p& W ~, B/ F1 i
抗生素,你看参考文献就行。这应该没什么问题,我的水不是酸处理的,不用每天换。FBS的使用,我的理解和你一样,
作者:
hyde
时间:
2014-6-30 12:14
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goblinwang
的帖子
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谢谢
/ j% C. b% l# t g9 p+ ^- c1 A
作者:
干细胞之家-吕
时间:
2018-4-3 23:27
有成功经验吗?求教
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