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标题: 大鼠急性心肌梗死模型的建立和心肌内移植手术步骤: [打印本页]

作者: ciweiyuan 时间: 2014-4-11 11:03 标题: 大鼠急性心肌梗死模型的建立和心肌内移植手术步骤:

(1)给予大鼠0.3ml/100g的10%水合氯醛腹腔注射麻醉。剪去胸前区和部毛发。用碘伏消毒两遍。: e& q: f+ u& w. Z9 B
(2)在相当于颈6水平横形切口剪开颈部皮肤，分离皮下组织及肌肉，露气管。用22号套管针行气管穿刺，进入气管后，拔除针芯，连接动物定压呼吸机。行间歇正压通气，频率为50~60次/分，调节压力见到胸廓起伏为准。
(3)沿胸骨左缘3、4肋间逐层剪开皮肤和皮下筋膜，撑开肌肉，断第肋，打开胸腔，剪开心包，露出心脏，用4号小圆针及0/5丝线在左耳下缘约5mm处结扎冠状动脉前降支。) W w. b; F, S; Z% n
(4)观察20min后，左心室前壁颜色变苍白，收缩力减弱，认为心梗模建立成功。在心梗结扎的下方左心室的心梗区边缘区分5点，用微注射器在心肌浅层注射2×106个已标记的BMSCs(50ul/点)
(5)观察没有出血后，关闭胸腔，在切口上撒青霉素粉预防感染，再关肌肉及皮肤。逐层关闭颈前区切口。待呼吸平稳后，拔出气管插管给予低流量吸氧2小时。术后连续3天腹腔注射青霉素8万U/只。5 Y9 }" ^6 L% V
2. 移植细胞的观察+ e& k% V r: M) u
分别在细胞移植后1周、2周、3周和4周，每次取2只大鼠心脏，冰冻片，在荧光显微镜下观察移植细胞。7 [4 i/ m) A8 [
(l)大鼠0.3ml/100g的10%水合氯醛腹腔注射麻醉后，剪开胸腔，取出心用冰冻生理盐水洗净。
(2)将心脏用胶水包埋后，放入冰冻切片机冷冻，约15min后，进行切切片厚约为8μm。/ U+ u: Z. K0 T9 U+ l( d/ k
(3)将切片放在一20℃的丙酮中固定15min，再用PBS洗3次，5 min/次，避光保存于一20℃冰箱中。

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