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标题: 脐带间充质干细胞培养问题 [打印本页]

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作者: shuimochunlan    时间: 2013-7-22 14:45     标题: 脐带间充质干细胞培养问题

请教，都知道在脐带间充质干细胞的传代培养中，需要消化后吹打均匀传代，才能生长的好点，我们在吹打的过程中，总是遇到细胞成片脱落，形成膜状，较难吹打均匀，请问造成这种现象的原因是什么？是因为消化时间太短？酶浓度不够还是别的什么原因？怎么解决？（我们是用的0.05%胰酶，消化3-5分钟，在培养箱内消化的）

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作者: bj123    时间: 2013-7-22 15:39

回复 shuimochunlan 的帖子
  M1 L/ ^* w/ b: x( U% X9 @9 `4 j5 V# n
消化时间太长，导致DNA裂解。

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作者: lady    时间: 2013-7-22 17:58

额 木有遇到过。  我们都是稍微变形，就开始吹打。。。木有消化那么长时间...

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作者: ytumuyangren    时间: 2013-7-22 18:32

成膜片状，应该是你的细胞长过了，MSC如果培养时间太长，会长成膜片状，这样在消化的时，得到的就是膜片状。所以楼主可以在细胞长至70-80%，开始消化进行后续试验，

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作者: shuimochunlan    时间: 2013-7-23 08:49

回复 ytumuyangren 的帖子1 A8 F" ~, @* q; B! [! H
. ?. \1 A1 i2 E, z% P4 R
我觉得可能是生长过了，我们培养的是养了两天，第三天就开始传代了，要是这样也生长过的话我们就要培养一天半就要传代了

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作者: shuimochunlan    时间: 2013-7-23 08:50

回复 lady 的帖子
5 O) v1 |) _) c" A! w7 ]- n3 C8 N5 `9 p: u1 T# ^. U  {
我们也观察的，时间只是预定的而已，不会是消化时间长了

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作者: CELL007    时间: 2013-7-23 14:31

可能传代密度高吧。

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作者: 三月桂花香    时间: 2013-7-23 14:37

传代密度过高？导致细胞长得太密了吧，消化的时间是不是稍微可以缩短点，我们用的是0.125%四分钟，传代接种是到达78-80%漂浮就传代。

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作者: shuimochunlan    时间: 2013-7-23 16:36

回复 三月桂花香 的帖子. Y* w( x. p6 [0 U  S0 C
! T; ~. E& k$ ]3 A0 r: j% W
这个是很有可能的，下次考虑两点，一，降低传代时的接种密度，现在是一传二，可以考虑更改为一传三；二，密度不变的情况下考虑缩短培养时间。

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作者: shuimochunlan    时间: 2013-7-23 16:40

回复 shuimochunlan 的帖子
, V4 O! U% e. U# R( d: ^6 X, N+ W; c8 I# m+ O/ D6 [
细胞长成膜状对细胞的损害到底有多大呢？除了造成细胞过早衰老还有什么危害？
7 M; [6 m& j& H6 U

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作者: a565170383    时间: 2013-7-26 20:39

胰酶0.125%培养瓶内消化2分钟OK

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作者: xiangxu    时间: 2013-8-6 15:35

消化不完全，物理吹打的结果！
) }' E3 F" `/ g! `0 m% a0 V$ }用0.25%的胰酶（加EDTA）消化,10分钟以内即可。

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作者: 风信子deon    时间: 2013-10-25 17:25

刚刚入门，学习下

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作者: cjq12862    时间: 2013-11-8 15:52

考虑两点：
3 r4 g1 h# F& F3 m- W) ?$ S) P1、是否细胞培养时间过长；. d) ?1 F; D& w% B# W+ y
2、是否存在污染。

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作者: 小样    时间: 2014-4-17 10:22

细胞消化食呈片脱落，可同一代次为什么也会出现？有的呈片有的呈沙状脱落呢？求高人指点。有人说因为细胞密度过大，有人说消化时间长，到底是什么原因呢？？？

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作者: 细胞海洋    时间: 2014-4-18 10:11

回复 小样 的帖子$ G) f( g: g) {. x: D% }
5 R. n  v3 T9 ^
建议你发新帖提问

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作者: 小样    时间: 2014-5-8 15:13

回复 细胞海洋 的帖子
% s* P5 o8 y) R& a  x
: I0 ~- E5 @7 b0 d. M8 ^) e# K恩恩，谢谢

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作者: 309208770    时间: 2015-3-23 14:01

回复 shuimochunlan 的帖子* M) \8 a  G% r! M
: k0 l0 o2 m5 D/ v7 i* Q
细胞长成膜状，是长得太满，消化时不容易成单个细胞消化，培养传代时这样的细胞不容易贴壁

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作者: 维维睡啦    时间: 2015-3-23 16:06

原因：你的细胞长过了，没有及时对细胞进行处理造成的。细胞融合率高，细胞排列过于紧密，细胞与细胞之间粘连结实。消化时，细胞成块脱落，粘在一起形成膜状，消化的时间再长也是没用的，反而会伤害细胞。不过这种现象可以继续传代，传代比例可以稍微加大。+ ]% _2 p  `% ]! [! e
解决方法
- \" B- O, L9 b  H1、以后培养时，细胞融合率达到80%左右即传代。; y  r; E. `% s4 j$ Z" q  F7 p! H
2、加大传代比例。
, a, b) {- h) h: y3、适当减短细胞培养周期。
' L' T) U+ o2 J, A" [4、养成经常观察细胞长势的良好习惯，及时对细胞进行处理。

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作者: neng172    时间: 2015-3-31 09:25

1、细胞长的太满的，下次长满80%左右就要传达了
, ^7 `+ V/ T2 t$ I6 }2、或者改用0.25%的胰酶消化  

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作者: 龘龘    时间: 2015-8-3 00:36

首先，应该是长过了，其次，你的消化液浓度较低，导致消化时间偏长，把消化液浓度提升到0.1左右，这样你就不需要在培养箱中消化了，尽量减少消化时间，消化过程对细胞有伤害的。

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作者: 蚂蚁上树    时间: 2016-2-26 14:57

7 I6 F# J, E" M3 ]/ ^; z( b
1 Z: s* P( t, t9 p
消化时，细胞成片掉下一般是细胞长过了，建议根据细胞生长速度估计传代时间，一般间充质干细胞状态比较好的话，要尽早传代，还有就是胰酶的浓度是不是太低了，我们一般都是用0.25%胰酶消化，脐带间充质两分钟消化就差不多了。

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作者: 13153546906    时间: 2016-8-12 14:04

回复 xiangxu 的帖子0 n+ `- M3 n) |3 O

) h. c1 T) Q" \! M2 O! D这么高的浓度，应该1-2分钟就可以了吧
. U, L; b, \( I$ }# c6 ]# w3 p

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作者: 13710232281    时间: 2016-8-26 17:01

我听过说养间充质干细胞，宁可消化不充分，也不能过度消化

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作者: winstonsee    时间: 2016-9-30 15:12

传代密度过高、胰酶消化时间过长都是原因吧，刚开始做的建议在显微镜下观察，接种密度和消化时间对细胞的生长都很重要，接种密度过密导致生长抑制甚至分化，过稀导致生长缓慢甚至老化，胰酶消化时间过长会导致细胞损伤，影响细胞的生长

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