神经干细胞培养包被物的选择

changbo529

各位前辈您们好：小弟想请教下三种包被物多聚赖氨酸、层粘连蛋白和纤连蛋白对神经干细胞培养的影响。请多多指教，不胜感激，谢谢

Life_Tech

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4 W5 v) r: M  G8 d9 x! |我们推荐纤连蛋白或CELLstart™ CTS™配制基质，可参考该链接中的实验方案lifetechnologies.com/neuroprotocol/hnsc
/ J$ f2 P% G7 _完整的实验方案已汉化，稍后分享给大家/ c! m2 F6 o6 P1 o8 z! g2 [! B$ ]

; _+ `0 Z4 V$ a3 ^采用CELLstart™ CTS™包被培养器皿
# ~5 G5 \. S5 f- m9 {) A) H1. 用含有钙和镁的D-PBS以1:100稀释CELLstart™ CTS™ (如，50 μL的CELLstart™
: L  g) s% y# u6 X" S2 u4 d8 kCTS™稀释至5 mL的D-PBS中) 。/ Z3 O- d: B6 i
注：CELLstart™ CTS™ 不得冷冻、涡旋振荡或剧烈搅拌，否则可能形成凝胶。
4 i. v6 E$ `5 g# F2. 用CELLstart™ CTS™工作液包被培养器皿的表面 (T-75：14 mL，T-25：7 mL，60-mm2 k" U7 H1 T) R( R" u" G5 U
培养皿：3.5 mL，35-mm培养皿：2 mL) 。# f+ p$ l7 R; q: [: l2 k
3. 将培养器皿置于37°C、5% CO2环境中孵育1小时。
# y# d1 A0 Z" R6 J- }& e4. 从孵箱中取出器皿，储存待用。使用前去除所有CELLstart™ CTS™溶液，在器皿中加入StemPro® NSC SFM完全培养基。
; m7 {3 f: b) N  C3 x$ f注：您可以提前包被培养板，置于4°C下储存，用Parafilm®密封包裹，至多保存2周。直至使用前，切勿去除CELLstart™ CTS™溶液。确保培养板不变干。8 I4 ^5 J0 b0 L7 w3 a' u7 s

& S- a8 ?, t4 B/ O' n采用纤连蛋白包被培养器皿7 _9 z$ a8 l# J. }& N7 Z) Q
1. 用蒸馏水稀释纤连蛋白，配制成1mg/mL的储存溶液。. a' E: F8 p2 E, A
2. 将工作液置于-20°C下保存待用。
* ~4 n0 X* ^) [) P/ L: y( O5 ^3. 将储存溶液加入D-PBS中，配制20 μg/mL的工作液。* [- w& C  q- i
4. 加入足量的工作液，覆盖培养器皿的表面 (T-75: 10 mL，60-mm培养皿: 2.5 mL，35-! q$ D- v- m; ?0 H* P6 h; s1 ?7 T6 A
mm培养皿: 1.5 mL) 。: `9 n* [$ I# K5 O% ]
5. 将培养器皿置于37°C、5% CO2环境中培养1小时。  n. p- w- x! [$ Q" P
6. 从孵箱中取出器皿，储存待用。使用前去除纤连蛋白溶液，在器皿中加入StemPro® NSC SFM完全培养基。
) G% k) g* c. l, L' N3 ^3 c注：您可以将纤连蛋白处理的培养板置于4°C下储存，用Parafilm®密封包裹，至多保存2 周。确保培养板不变干。无需清洗步骤，吸取多余液体后可直接使用培养皿。

changbo529

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* ^) b9 ]) U; z9 z+ p非常感谢老师细心的指导

Life_Tech

回复 changbo529 的帖子. s9 m5 S- d! T, w
, C7 ?  j9 n) w- i8 w$ \
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  Z! ?  s3 P) r5 T% u5 w) xhttp://www.stemcell8.cn/thread-72983-1-1.html