选择的细胞，必须在对数生长期，这个就要根据你的细胞本身的特性，以及接种的密度都有关系了。你可以考虑一下取24h，和48h的比较一下，一般细胞都是这之间。实在不行的话，估计就要做个生长曲线来确定一下你的细胞的对数期。 % B6 B' p+ W5 R. B) h7 [. S我认为你第二个问题也是因为没有选到对数生长期的细胞造成的，一般的话，低渗还是比较容易。你做个梯度，20min，30min，40min试试看，一般也就是30min就行的，所以，还是应该摸索一下你的细胞的对数生长期才是最关键的。作者: SKC-SFC 时间: 2012-11-2 14:30
回复 xbs530515 的帖子- ~9 R! c& H4 N- n9 n: I
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嗯，说得有道理，第一次有40%的细胞是可以看到分散的染色体，形态也很典型，固定和染色都不错。但第二次的实验结果失败，选取的细胞是36小时的细胞，低渗和固定后看到的细胞里看不到染色体的存在，低渗的话应该只是胀大，并不需要细胞膜破掉，我用的是KCl0.075M，作用时间为30min，秋水仙素的使用浓度为终浓度0.45ug/mL。作者: 突击兵之小土豆 时间: 2012-11-7 14:54
回复 SKC-SFC 的帖子 1 g: {4 J9 O3 j. s; c 2 @: ?( _* h6 Q' T 能看到分散的染色体，关键是滴片，注意利用热胀冷缩，具体方法不透露了。只要掌握好距离滴片，一般很容易的。作者: SKC-SFC 时间: 2012-11-9 17:20
+ S F' d- A& ^1 V7cm左右吧，一手拿吸管瞄准，一手拿冷的载玻片（注意要有雾气，没有立马不要），瞄准，然后快速滴，不管滴的怎样，快速滴20个板，最后画圈，用松脂封片（我个人比较喜欢松脂，本来还想手工做个琥珀呢）。熟能生巧，多练就越来越准的。加油啊6 P2 `( F# W1 E! _4 E8 d+ K s
本帖最后由 cartoonyang 于 2012-11-20 10:18 编辑 ; }% o$ {, J8 y
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很好的帖子。 $ r( K' b% L h; q, B! g2 x我之前做了很多体细胞的核型分析，分散效果一直不好。我在想，可能当初我没用预冷的载玻片有很大关系。 , Q9 ^% \( p# e# S/ G谢谢分享！！！作者: cartoonyang 时间: 2012-11-20 10:45
Briefly, actively proliferating cells were incubated with colchicines (0.1 lg/ml) for 4 h at 37 _C. The cells were washed twice with DPBS, trypsinized, suspended in a chilled hypotonic solution (68 mM KCl) and incubated for 20 min at 37 _C and then fixed for 10min in chilledfixative (methanol and glacial acetic acid, 3:1). The pellets were suspended in 5 ml of chilled fixative for another 10min. The metaphase spreads were prepared by dropping the cell suspension onto ice cold glass slides. 8 Z1 ?8 q3 Y0 K1 M1 P. {
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网上找的，我准备用这个方法试试。供分享！