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标题: 分化实验设计问题，很急~ [打印本页]

作者: angelyannan 时间: 2012-10-31 16:09 标题: 分化实验设计问题，很急~

最近在做磁场对神经干细胞分化影响的实验，前期主要用免疫荧光法检测神经干细胞向各种神经细胞分化比率的情况。由于是免疫荧光伐，所以细胞接种密度较低，并且是接种在小的爬片上。现在想用western blot的方法检测其中某些蛋白的表达情况，可是细胞量太少，且又是贴壁细胞，蛋白提取遇到麻烦。请问各位大侠有什么好的建议？若是WB实验增加细胞密度的话能否和前面的免疫荧光实验保持一致？

作者: prophe 时间: 2012-10-31 17:33

本帖最后由 prophe 于 2012-10-31 17:36 编辑
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“贴壁细胞，蛋白提取遇到麻烦”，什么意思，贴壁细胞可以胰酶消化后离心收集细胞提取蛋白即可。增加细胞密度对分化可能会有影响，可用较大的培养瓶增大细胞量，个人意见，希望对你有帮助！

作者: angelyannan 时间: 2012-10-31 19:10

回复 prophe 的帖子

用胰酶会不会对蛋白造成影响呢？我们现在其他的WB实验的是直接在孔板里面，移除培养基，用PBS清洗，后添加裂解液然后将细胞用刮刀刮下来。所以这样的话裂解液一定要很少的量才能确保蛋白浓度不至于过低。但是我的现在是细胞爬片，用来做免疫荧光，细胞爬片的面积很小，接种密度又低，要是换成瓶子会不会也对实验结果造成影响呢？理论上这是是否可以的呢？

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