干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 求助！EB不贴壁！ [打印本页]

作者: ligangtiancai 时间: 2012-7-31 11:35 标题: 求助！EB不贴壁！

如题，我在EB诱导过程中遇到几个问题：我用1*10*5/ML的密度将iPS细胞悬浮在低粘附的6孔板中，可形成的EB周边不够圆滑，感觉像是有很多的死细胞，而且悬浮5天后转移到铺明胶的板中后几乎没有贴壁的EB。查了一下大家说可能是iPS状态和EB质量的问题，可是我的iPS状态一直都不错，呈边缘透亮的卵圆形，可形成的EB边界总是感觉不够清晰，死细胞很多（悬浮和悬滴都试过，都是一样），不知是什么原因？谢谢！

作者: zmm 时间: 2012-7-31 12:35

回复 ligangtiancai 的帖子

ips本身状态不错的话，那时不是培养EB时的液体有问题？还有就是做EB时消化时间是否太长了？

作者: ligangtiancai 时间: 2012-7-31 12:51

回复 zmm 的帖子& C) y! ~+ \0 S1 q, m$ {+ n/ n
- l/ _/ p# L) P
培养基是高糖dmdm+20%FBS+1%NEAA+1% L-Glu 都是PAA的，之前用过10%和15%的FBS，结果也类似。iPS消化约2分钟，不知是不是消化的问题，但同一瓶中的细胞传代后生长良好

作者: zmm 时间: 2012-7-31 20:46

回复 ligangtiancai 的帖子

你这个培养基有问题吧？不加lif？培养基的成分还是挺重要的。你培养EB时可尝试用一下国产皿或者玻璃皿。

作者: ligangtiancai 时间: 2012-8-1 10:54

回复 zmm 的帖子
, o% G8 Z5 U, C8 v0 O
我这个是诱导分化时的培养基。培养EB我用的是corning的低粘附板，主要是在悬浮5天后需要贴壁培养时EB不贴壁

作者: zmm 时间: 2012-8-1 11:54

回复 ligangtiancai 的帖子
: e/ T" }$ n: Z9 d
那你铺明胶了吗?

作者: ligangtiancai 时间: 2012-8-1 23:59

0.1%明胶包被30分钟

作者: frankieisme 时间: 2012-8-2 01:59

你可以把0.1%明胶包被时间延长到过夜or24h.还有EB接种好后最好前24h内不要动培养皿.我觉得最主要的原因可能是你EB的质量不太好的原因. 悬浮培养的时候最好每天换液,随着EB的生长,可以看到培养液变黄的程度越来越明显.

作者: ligangtiancai 时间: 2012-8-2 20:18

回复 frankieisme 的帖子" y3 ~. }5 G& z" Q) ]5 j" O
+ R) \ p& F9 I. L) X
恩，我觉得你说的挺对。应该还是EB本身的质量不太好。不过我的iPS一直状态还有不错，难道问题出再EB的制作上，能告诉我一下你制作EB的详细过程么？

作者: 也行天下 时间: 2012-8-17 10:43

回复 ligangtiancai 的帖子. A) ?& V. @/ b: ?2 ~& U! f: }
" K1 w4 |9 d' D: m& B* H- T2 Y. x% {
我们最近用AggreWell培养板做的EB，很漂亮，在后面的培养中，贴壁也很好。

作者: xieyuhuan 时间: 2016-8-11 10:55

求帅哥传授下如何做EB球，具体的一些细节

作者: 细胞海洋 时间: 2016-8-13 19:37

回复 xieyuhuan 的帖子

建议你发新帖提问

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://stemcell8.cn/)