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标题: G-CSF和GM-CSF动员小鼠造血干／祖细胞过程中对外周血T淋巴细胞亚群的影响 [打印本页]

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作者: 文献管理员    时间: 2009-3-3 11:37     标题: G-CSF和GM-CSF动员小鼠造血干／祖细胞过程中对外周血T淋巴细胞亚群的影响

作者：高立艳 徐开林 潘秀英作者单位：徐州医学院护理学系，江苏  徐州  221002 / {) H2 O& n' J! w" q4 K9 D
                  
3 L& v# G3 _5 m% G/ V" l                  8 t4 w5 [! q" x9 q  Z0 V7 ~7 N
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. ?; A& X% i$ Z  l# D* v' ^            
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& m& b9 M# h, y        
# W, G' s5 I- [9 {! M. }        
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& M; T/ A) G% S, [1 K* D, H          【摘要】  目的  观察粒细胞集落刺激因子（G-CSF）和粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）单独、同时或序贯联合应用动员小鼠外周造血干细胞时，外周血T细胞亚群的变化。方法  72只BALB/c小鼠随机分成A、B、C、D、E、对照组6组，皮下注射：A组，重组人（rh）G-CSF 400 μg·kg-1·d-1；B组，rhGM-CSF 400 μg·kg-1·d-1；C组，rhG-CSF 200 μg·kg-1·d-1  rhGM-CSF 200 μg·kg-1·d-1；D组，rhGM-CSF 400 μg·kg-1·d-1（前3天）＋rhG-CSF 400 μg·kg-1·d-1（后2天）；E组，rhG-CSF 400 μg·kg-1·d-1（前3天）＋rhGM-CSF 400 μg·kg-1·d-1（后2天）；对照组，生理盐水0.2 ml，连续注射5天。动态观察外周血白细胞计数，同时通过流式细胞仪测定外周血T细胞亚群的变化。 结果  rhG-CSF与rhGM-CSF联合方案动员外周血白细胞计数较高；动员后各实验组CD 3细胞、CD 3CD 8细胞、CD 3CD-4CD-8细胞增加，CD 3CD 4/ CD 3CD 8比值下降，GM-CSF明显提高了CD 3CD-4CD-8细胞比例。结论  G-CSF和GM-CSF动员小鼠外周血造血干／祖细胞过程中对T淋巴细胞亚群的数量和比例有一定的影响，其可能有免疫调节作用。 1 y- @' f) `6 ^  C3 C5 i; H
          【关键词】外周血干细胞 动员 粒细胞集落刺激因子 粒-巨噬细胞集落刺激因子 T淋巴细胞亚群' f2 g* f4 h( q3 o( c2 T
                  Changes of T cell subsets in the peripheral blood of mice after mobilization of
2 w& P+ q  r* O6 E' C$ X: f
7 o: n5 O1 }! d0 ~+ y* B/ R( W* i3 |* lhematopoietic stem cells by G-CSF and GM-CSF
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! K7 t# U* I6 L$ \+ y2 CGAO Li-yan1, XU Kai-lin2, PAN Xiu-ying2: O& i- \* p. M: D
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（1. School of Nursing, Xuzhou Medical College, Xuzhou, Jiangsu 221002, China;$ F. `; t3 a2 q0 A/ V9 r

2 L2 d8 _% h  B# z* c$ [# [1 e! J( y2. Department of Hematology, Affiliated Hospital of Xuzhou Medical College）5 }: ~$ p; M# a7 h& S

8 U7 D7 D$ a4 g/ O" oAbstract： ObjectiveTo observe the changes of T cell subsets in the peripheral blood of mice after the mobilization of hematopoietic stem cells with granulocyte colony stimulating factor （G-CSF） and granulocyte-macrophage colony stimulating factors （GM-CSF） given alone, concurrently, or in sequential combination. Methods72 BALB/c mice were divided into 6 groups （n=12 each）: groups A, B, C, D, E, and the control group to proceed with the following regimens for mobilization respectively: group A. rhG-CSF 400 μg·kg-1·d-1 alone; B. rhGM-CSF 400 μg·kg-1·d-1 alone; C. concurrent combination of rhG-CSF 200 μg·kg-1·d-1 and rhGM-CSF 200 μg·kg-1·d-1; D. sequential combination of rhGM-CSF 400 μg·kg-1·d-1 for 3 days followed by rhG-CSF 400 μg·kg-1·d-1 for 2 days; E. sequential combination of rhG-CSF 400 μg·kg-1·d-1 for 3 days followed by rhGM-CSF 400 μg·kg-1·d-1 for 2 days; and control group. subcutaneous saline 0.2 ml for 5 successive days. The white blood cells （WBC） were counted under microscope; the percentile changes of T cell subsetswere assayed by flow cytometry at serial time points. ResultsThe yields of WBC were significantly higher after the combined use of G-CSF and GM-CSF for mobilization than those after the use of rhG-CSF or rhGM-CSF alone. Compared with that in the control group, the percentages of CD 3,CD 3CD 8 and CD 3CD-4CD-8T cells were all increased, and the ratio of CD 3CD 4/CD 3CD 8 was reduced in the experiment groups. The use of GM-CSF caused marked increase in the proportion of CD 3CD-4CD-8. ConclusionIn the process of mobilization of hematopoietic stem cells, G-CSF and GM-CSF will alter the number and the proportion of T cell subsets, possibly through an immunoregulatory function.
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Key words: mobilization; granulocyte colony stimulating factor; granulocyte-macrophage colony stimulating factor;T lymphocyte subsets' s5 N2 p/ a  x2 ^7 v- i* m

/ t8 l8 y0 v' P* J2 J0 I% N6 W+ @近年来外周血干细胞移植（PBSCT）技术正越来越多地应用于恶性肿瘤尤其是恶性血液病的治疗。与异基因骨髓移植（allo-BMT）相比，异基因外周血干细胞移植（allo- PBSCT）后造血重建和免疫重建速度均较快，虽然allo-PBSCT输注的移植物中淋巴细胞数量显著高于allo-BMT，但急性移植物抗宿主病（aGVHD）的发病率并没有明显增加，而移植物抗肿瘤（GVT）效应则有所增强，无病生存率提高［1~3］。目前，allo-PBSCT多采用粒细胞集落刺激因子（G-CSF）和粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）的动员方案，因此人们除了重视G-CSF和GM-CSF的动员效应以外，也日益重视其在干细胞动员过程中对免疫细胞的作用。我们在比较G-CSF和GM-CSF单独、联合应用动员小鼠外周血造血干细胞效果的同时，对T淋巴细胞亚群的变化进行了初步研究，现报道如下。- S- X9 R$ q% A2 F+ @" [

7 V# ^. H' x: N' o. k' I7 ? 1材料和方法
/ \% G& Y( }- t. a0 j: \
+ X1 h' ]# m; I7 U1.1实验动物BALB/c小鼠72只，雌雄各半，体重18～22 g，为清洁级近交系小鼠，鼠龄10～14周，购自徐州医学院实验动物中心，按清洁级标准饲养。" o6 d& X0 H1 l) q: ]/ z

  c/ O' ]' M8 \, n8 n. W% y- b1 B2 n1.2主要药品试剂和仪器重组人（rh）G-CSF购自杭州九源基因工程有限公司；rhGM-CSF购自厦门特宝生物工程有限公司；CD45-PC5、CD34-PE、CD38-FITC单抗购自BD公司；培养基IMDM购自Hyclone公司；流式细胞仪（BECTONDICKINGON公司）；CO2培养箱（FORMA公司）。
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  F  y; V: J$ o9 V1.3分组与给药方法BALB/c小鼠72只，随机分成6组，每组12只。A组： rhG-CSF 400 μg·kg-1·d-1；B组：rhGM-CSF 400 μg·kg-1·d-1；C组：rhG-CSF 200 μg·kg-1·d-1  rhGM-CSF 200 μg·kg-1·d-1，A、B、C各组连续皮下注射5天。D组： 前3天皮下注射rhGM-CSF 400 μg·kg-1·d-1，后2天皮下注射rhG-CSF 400 μg·kg-1·d-1；E组： 前3天皮下注射rhG-CSF 400 μg·kg-1·d-1，后2天皮下注射rhGM-CSF 400 μg·kg-1·d-1；对照组：连续5天皮下注射生理盐水0.2 ml。
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1.4检测指标& Q4 O) ~* e) Z, V$ ^7 t4 t

, R: _! w' o% P; g9 z; y1.4.1外周血白细胞计数分别于0~6天连续取小鼠尾静脉血5 μl，加入预先配置的3%的稀盐酸中，混匀后，利用细胞计数板在显微镜下进行白细胞计数。" @) V/ U& {' X! s( G- d

$ S: }4 p' P0 H& v1.4.2外周血T淋巴细胞亚群检测3~6天取小鼠尾静脉血50 μl，加入CD4-Cy单抗5 μl，CD8-PE单抗5 μl，CD3-FITC单抗5 μl混匀，室温下避光20 min进行单抗标记，加入2 ml溶血素后避光8 min，PBS洗涤2次，1000 r/min离心2 min，即上机测定。用流式细胞仪（FCM）检测CD 3细胞、CD 3CD 4细胞、CD 3CD 8细胞、CD 3CD-4CD-8细胞、CD 3CD 4细胞和CD 3CD 8细胞比例。, U4 u1 k; @; f3 J0 K$ g
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1.5统计学处理所有数据应用SPSS 11.0软件进行数据处理，采用方差分析和t检验。
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2结果
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2.1动员前后小鼠外周血白细胞的变化除对照组外，各实验组在注射后24 h白细胞升高幅度最大，随用药时间延长白细胞数进一步升高，各组均在第5天达高峰，明显高于对照组和用药前（P﹤0.01）。第5天达高峰时，A、C、D、E各组白细胞数均显著高于B组（P﹤0.01），而 A、C、D、E各组间相比较无显著性差异（P﹥0.05），动员剂停用后24 h各实验组白细胞数均开始下降。提示单用G-CSF或G-CSF与GM-CSF联合的动员方案较单用GM-CSF组白细胞升高更明显（表1）。表1不同动员方案各时间点外周血白细胞计数
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6 D1 M( u$ e1 k# y# o% U( A2.2动员前后外周血T细胞亚群变化动员第5天，白细胞升高达高峰时，各实验组外周血CD 3细胞比例均显著高于对照组（P﹤0.001），各实验组间对比CD 3细胞比例无显著性差异（P﹥0.05）。CD 3CD 4细胞、CD 3CD 4CD 8细胞比例，各实验组与对照组相比无明显差异（P﹥0.05）。外周血CD 3CD 8细胞比例，各实验组明显高于对照组（P﹤0.05），各实验组间比较CD 3CD 8细胞比例无显著性差异（P﹥0.05）。动员高峰期各实验组CD 3CD 4/ CD 3CD 8比值较对照组（P﹤0.05）降低，各实验组间无显著性差异（P﹥0.05）。A、B、C、D、E各实验组CD 3CD-4CD-8细胞比例在动员高峰期明显高于对照组（P﹤0.001），CD 3CD-4CD-8细胞增高顺序依次为实验B组﹥D组﹥C组﹥E组﹥A组。提示：动员后CD3 细胞、CD3 CD8 细胞增加，CD4 / CD8 比值下降，各实验组间无显著差异。CD 3CD-4CD-8细胞比例增高以单用GM-CSF组最高，单用G-CSF组最低（表2）。表2不同动员方案各时间点外周血T细胞亚群变化
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3讨论
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# H3 M* p( c% P+ K! KT淋巴细胞亚群在移植免疫中发挥着重要作用，异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后的aGVHD及自体造血干细胞移植后免疫功能的恢复均与其密切相关。已有研究发现经G-CSF和GM-CSF动员PBSC的过程中T细胞亚群的比例、数量产生了相应的变化，如Th0向Th2、Tc2细胞分化，而Th2、Tc2亚群比例增高，Th1、Tc1亚群降低，从而导致allo-PBSCT后GVT作用增强，aGVHD发生率及严重程度并未增多，而慢性GVHD的发生有增高趋势［1~5］。我们的实验结果显示在G-CSF和GM-CSF动员PBSC的过程中，随着白细胞计数的增高，不同的动员方案对T淋巴细胞亚群产生了不同影响。
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; W; R4 d5 Q3 [/ \7 X在稳定的生理状态下，存在于骨髓中的免疫细胞为较不成熟的免疫细胞，而外周血中存在的是成熟的、经过胸腺选择的并具有各种功能的效应细胞。研究发现，G-CSF动员后引起T细胞黏附分子L-选择素的表达降低，从而阻碍了T淋巴细胞穿越血管内皮细胞进入淋巴组织或其他血管周围组织，这样T细胞在血管循环池中发生积蓄而使得外周血T细胞数量在动员后大量升高［6-7］。大量动物实验发现，G-CSF动员能够极化T细胞所分泌的细胞因子，使T淋巴细胞亚群发生变化，IL-4、IL-6、IL-10等Ⅱ类细胞因子分泌增加，而促发GVHD发生的IL-2、TNF-α、IFN-γ等Ⅰ类细胞因子分泌减少，aGVHD的发生率和严重程度降低［4-5,8］。本实验结果表明，细胞因子在动员小鼠PBSC的同时，改变了小鼠外周血T淋巴细胞的数量及比例，各实验组CD 3细胞、CD 3CD 8细胞比例明显高于对照组，CD 3CD 4/ CD 3CD 8比值低于对照组，初步提示免疫应答的负调节占优势，具体的免疫调节机制需进一步分析CD 3CD 4、CD 3CD 8细胞分别向Th1、Th2、Tc1、Tc2分化的能力。: d4 ^! Y$ ]# H4 K
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在T淋巴细胞的分化过程中，最先出现的是CD 3CD-4CD-8细胞，在经过胸腺的过程中进行阳性选择及阴性选择后，细胞表达CD 3CD 4CD 8，当此种细胞经过胸腺髓质的过程中，CD 3CD 4CD 8细胞进一步分化为CD 3CD 4细胞和CD 3CD 8细胞，进入外周血循环并执行其生理功能。研究结果显示，在G-CSF/GM-CSF动员小鼠PBSC的同时，CD 3CD-4CD-8细胞在外周血的比例明显增高。CD 3CD-4CD-8细胞为外周血成熟T细胞的前体细胞，动员后明显上升，说明T淋巴细胞与造血干细胞迁移具有较好的一致性。CD 3CD-4CD-8细胞又称为自然抑制细胞，能够抑制混合淋巴细胞反应中的增殖反应并可抑制CD 3CD 4、CD 3CD 8细胞对异体细胞的细胞毒作用，从而降低了allo-PBSCT后aGVHD的发生率［9-10］。亦有研究发现CD 3CD-4CD-8细胞是通过抑制CD 3 CD 8细胞的活化、增殖，并通过Fas-FasL途径破坏已激活的CD 3 CD 8细胞、CD 3CD 4细胞而实现免疫抑制作用［11~13］。因此，细胞因子动员后CD 3CD-4CD-8细胞的过度表达可能有利于抑制aGVHD，对T细胞增殖、分化功能的改变起着协同作用。从不同动员方案CD 3CD-4CD-8细胞数量变化中也说明GM-CSF或GM-CSF与G-CSF联合的方案较单用G-CSF方案有可能降低GVHD发生，促进细胞免疫功能发挥。基于此，目前国内在进行非血缘或半相合allo-HSCT时已将G-CSF/GM-CSF动员后的骨髓＋外周血造血干细胞作为移植物可减轻GVHD的发生而保留GVT效应并取得了较好的移植效果［14］。# Q( m/ ^' I2 P, Q

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作者: laoli1999    时间: 2015-7-9 15:18

家财万贯还得回很多贴哦  

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作者: 我心飞翔    时间: 2015-8-20 09:27

有空一起交流一下  

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作者: 命运的宠儿    时间: 2015-8-21 09:16

努力,努力,再努力!!!!!!!!!!!  

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作者: 龙水生    时间: 2015-10-1 15:45

人之所以能，是相信能。  

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作者: 张佳    时间: 2015-11-14 16:51

21世纪，什么最重要——我！  

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作者: marysyq    时间: 2015-11-21 16:45

问渠哪得清如许，为有源头活水来。  

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作者: 龙水生    时间: 2015-11-25 11:26

看看..  

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作者: 张佳    时间: 2015-12-14 15:12

偶真幸运哦...  

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作者: 泡泡鱼    时间: 2015-12-28 07:26

我又回复了  

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作者: nauticus    时间: 2016-1-8 09:10

必须顶  

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作者: 大小年    时间: 2016-1-27 09:40

原来这样也可以  

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作者: immail    时间: 2016-1-30 23:08

原来是这样  

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作者: ikiss    时间: 2016-2-25 19:01

肿瘤干细胞

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作者: laoli1999    时间: 2016-3-4 07:33

顶的就是你  

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作者: 多来咪    时间: 2016-3-17 11:44

我顶啊。接着顶  

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作者: 123456zsz    时间: 2016-5-12 10:43

给我一个女人，我可以创造一个民族；给我一瓶酒，我可以带领他们征服全世界 。。。。。。。。。  

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作者: 再来一天    时间: 2016-6-9 13:00

干细胞研究还要面向临床

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作者: 丸子    时间: 2016-6-18 19:14

长时间没来看了 ～～  

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作者: hmhy    时间: 2016-7-2 16:59

祝干细胞之家 越办越好~~~~~~~~~`  

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作者: cjms    时间: 2016-7-9 14:10

来几句吧  

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作者: 123456zsz    时间: 2016-7-10 22:09

我有家的感觉~~你知道吗  

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作者: 若天涯    时间: 2016-7-25 07:13

来几句吧  

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作者: DAIMAND    时间: 2016-8-8 22:07

这个贴好像之前没见过  

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作者: 初夏洒脱    时间: 2016-9-4 14:01

真是有你的！  

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作者: sky蓝    时间: 2016-9-5 18:08

在线等在线等  

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作者: happyboy    时间: 2016-9-15 17:18

不管你信不信，反正我信  

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作者: awen    时间: 2016-9-29 15:57

慢慢来，呵呵  

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作者: awen    时间: 2016-10-7 11:17

楼上的稍等啦  

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作者: 坛中酒    时间: 2016-10-14 16:02

支持你一下下。。  

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作者: 杏花    时间: 2016-11-2 14:10

似曾相识的感觉  

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作者: pspvp    时间: 2016-11-7 20:00

不看白不看，看也不白看  

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作者: alwaysniu    时间: 2016-11-13 14:54

我好想升级  

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作者: dypnr    时间: 2016-11-16 21:33

我在顶贴~！~  

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作者: 温暖暖    时间: 2016-11-25 09:18

干细胞之家 我永远支持

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作者: apple0    时间: 2016-11-29 15:27

风物长宜放眼量  

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作者: wq90    时间: 2016-12-4 05:57

加油啊！！！！顶哦!!!!!  

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作者: nauticus    时间: 2017-2-24 13:10

这贴子你会收藏吗  

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作者: 123456zsz    时间: 2017-3-13 20:10

一个有信念者所开发出的力量，大于99个只有兴趣者。  

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作者: 生物小菜鸟    时间: 2017-3-15 11:54

不错啊! 一个字牛啊!  

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作者: 墨玉    时间: 2017-4-8 23:58

每天到干细胞之家看看成了必做的事情

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作者: bioprotein    时间: 2017-4-24 07:18

干细胞之家 我永远支持

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作者: Diary    时间: 2017-5-19 01:16

我帮你 喝喝  

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作者: 狂奔的蜗牛    时间: 2017-5-23 11:35

干细胞美容

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作者: 旅美学者    时间: 2017-5-25 23:38

感觉好像在哪里看过了，汗~  

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作者: pspvp    时间: 2017-6-5 18:02

拿把椅子看表演

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作者: 糊涂小蜗牛    时间: 2017-6-26 08:43

设置阅读啊  

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作者: s06806    时间: 2017-6-29 15:01

造血干细胞

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作者: doc2005    时间: 2017-7-5 01:06

我是来收集资料滴...  

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作者: qibaobao    时间: 2017-7-7 13:01

赚点分不容易啊  

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作者: 983abc    时间: 2017-7-7 22:16

肿瘤干细胞

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作者: 草长莺飞    时间: 2017-7-14 14:35

每天到干细胞之家看看成了必做的事情

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作者: frogsays    时间: 2017-8-2 15:16

说的不错  

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作者: Kuo    时间: 2017-8-15 09:42

dddddddddddddd  

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作者: tuanzi    时间: 2017-9-3 01:40

我卷了~~~~~~~  

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作者: 苹果天堂    时间: 2017-9-10 07:43

谁都不容易啊 ~~  

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作者: 8666sea    时间: 2017-9-22 23:35

不看白不看，看也不白看  

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作者: myylove    时间: 2017-9-24 17:30

我等你哟!  

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作者: pspvp    时间: 2017-9-25 07:31

不错 不错  比我强多了  

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作者: 墨玉    时间: 2017-10-6 12:17

ips是诱导多能干细胞induced pluripotent stem cells iPS

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作者: yunshu    时间: 2017-10-12 08:10

家财万贯还得回很多贴哦  

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作者: ringsing    时间: 2017-10-24 04:09

表观遗传学

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作者: tuanzi    时间: 2017-10-25 17:28

呵呵 哪天得看看 `~~~~  

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作者: xm19    时间: 2017-11-11 23:03

宁愿选择放弃，不要放弃选择。  

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作者: 舒思    时间: 2017-11-29 18:01

给我一个女人，我可以创造一个民族；给我一瓶酒，我可以带领他们征服全世界 。。。。。。。。。  

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作者: chinagalaxy    时间: 2017-12-2 17:01

谢谢哦  

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作者: 碧湖冷月    时间: 2018-1-6 10:35

心脏干细胞

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作者: 墨玉    时间: 2018-1-26 23:42

我来了~~~~~~~~~ 闪人~~~~~~~~~~~~~~~~  

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作者: dreamenjoyer    时间: 2018-2-2 20:27

细胞治疗行业  

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作者: nauticus    时间: 2018-2-20 23:10

希望大家帮我把这个帖发给你身边的人，谢谢！  

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作者: xiao2014    时间: 2018-3-4 00:21

先顶后看  

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作者: chongchong    时间: 2018-3-9 06:10

昨晚多几分钟的准备，今天少几小时的麻烦。  

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作者: dr_ji    时间: 2018-3-10 14:38

留个脚印```````  

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作者: 罗马星空    时间: 2018-3-23 10:18

哈哈,这么多的人都回了,我敢不回吗?赶快回一个,很好的,我喜欢  

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作者: keanuc    时间: 2018-3-24 10:35

顶的就是你  

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作者: 石头111    时间: 2018-4-29 15:01

免疫细胞疗法治疗肿瘤有效  

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作者: tempo    时间: 2018-6-3 23:54

支持一下吧  

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作者: 老农爱科学    时间: 2018-6-17 15:45

是楼主原创吗  

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作者: renee    时间: 2018-6-22 21:47

好人一生平安  

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作者: 咖啡功夫猫    时间: 2018-6-28 15:35

我在顶贴~！~  

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作者: 旅美学者    时间: 2018-7-13 19:46

一个人最大的破产是绝望，最大的资产是希望。  

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作者: 蚂蚁    时间: 2018-7-28 11:01

干细胞之家 我永远支持

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作者: mk990    时间: 2018-8-1 10:27

造血干细胞

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作者: xuguofeng    时间: 2018-8-21 06:57

支持你加分  

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作者: chinagalaxy    时间: 2018-9-6 07:37

不错，看看。  

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作者: youngcell    时间: 2018-10-3 16:54

太棒了！  

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作者: pcr    时间: 2018-10-7 22:28

拿分走人呵呵，楼下继续！

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作者: highlight    时间: 2018-11-15 06:40

这贴子你会收藏吗  

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作者: 天蓝色    时间: 2018-11-25 02:57

观看中  

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作者: 追风    时间: 2018-12-6 09:35

厉害！强~~~~没的说了！  

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作者: sshang    时间: 2018-12-8 15:24

其实回帖算是一种没德德，所以我快成圣人了  

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作者: Whole    时间: 2018-12-10 10:54

ips是诱导多能干细胞induced pluripotent stem cells iPS

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作者: 咕咚123    时间: 2018-12-29 06:20

生殖干细胞

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作者: dr_ji    时间: 2019-1-4 23:20

小心大家盯上你哦  

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作者: pengzy    时间: 2019-1-6 17:51

心脏干细胞

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作者: tuanzi    时间: 2019-1-21 19:00

世界上那些最容易的事情中，拖延时间最不费力。  

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作者: 橙味绿茶    时间: 2019-2-20 15:17

感觉好像在哪里看过了，汗~  

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作者: 泡泡鱼    时间: 2019-3-5 01:37

哈哈 瞧你说的~~~  

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作者: 与你同行    时间: 2019-3-6 03:52

每天到干细胞之家看看成了必做的事情

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作者: immail    时间: 2019-3-12 12:00

顶下再看  

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