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标题: 小鼠间充质干/祖细胞高效扩增方案！ [打印本页]

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作者: 加拿大STEMCELL    时间: 2017-10-19 14:39     标题: 小鼠间充质干/祖细胞高效扩增方案！

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. w9 A' F6 A( k- r, HFewer Passages. More MSCs.: N5 v0 V% w  q+ D& f
With MesenPure™$ H( C7 [4 m' C
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小鼠间充质干细胞和间充质祖细胞（MSCs）用于研究免疫相关的分子学机制，包括免疫调节，各种免疫失调及人体细胞治疗和组织再生的临床前应用研究。如何在生成和扩增小鼠MSCs的过程中降低血细胞的污染的同时保持MSC的分化潜能一直是个挑战。5 ?0 i% H/ U( V& O, b; S

# ]4 A6 \7 Z; i- ^+ y$ `, bMesenPure™，包括使用MesenCult™ Expansion Kit (Mouse; Catalog #05513)，可以降低血细胞的污染，富集和促进MSCs的快速扩增。事实上，使用MesenPure™可以用更少的代数获得同等数量的富集后的小鼠MSCs。
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9 x  s( V: U- A$ R1 t& T; a4 g为什么使用MesenCult™扩增试剂盒（小鼠）？' @$ A; W4 P5 k) U7 J1 B- X' S7 e

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高效。从第0代开始即表现出强劲的小鼠MSCs扩增速率和显著的富集水平。
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灵活配搭。优化用于小鼠骨髓来源，密质骨来源和脂肪来源的MSCs和MEFs。5 P  p3 g2 k+ U" [  |: i

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功能性。保证培养同源性的小鼠MSC同时确保细胞的三系分化潜能。
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可靠。严格的原材料筛选和质量控制减小了批次间的差异和提高了实验的重现性。
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实验数据# a2 R7 V& r1 T% |/ w6 f
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图1：CFU-F检测结果对比图。使用含有和不含有MesenPure™的MesenCult™扩增培养基，或者其它商品化培养基培养小鼠骨髓（Bone marrow, BM）来源的MSCs。使用（A） MesenCult™扩增培养基（Control）或（B）MesenCult™扩增培养基 + MesenPure™的培养体系可检测出大量的CFU-F集落。使用（C）商品化培养基1或（D）商品化培养基2只能观测到很少的集落。接种密度：5x104个细胞/cm2。; I4 y* L- n, H: I' A1 h' l' }
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6 ^  l$ U2 F8 O# [& W$ j) o' n图2：使用MesenCult™扩增培养基长期培养扩增小鼠骨髓来源的MSCs。小鼠BM MSCs，在MesenCult™扩增培养基（Control）中培养扩增，与商品化的培养基1和2相比，表现出强劲的长期培养扩增水平。在早期，第0代细胞培养时加入MesenPure™在第8代后可提高细胞的扩增速率。小鼠MSCs的倍增时间分别为2.29天（使用MesenPure™）和3.01天（不使用MesenPure™）。长期在MesenCult™扩增培养基中培养小鼠BM MSCs，无论是否使用MesenPure™，都在低氧条件下效果较好。商品化的培养基1和2的标准化培养小鼠BM MSCs的流程推荐在正常氧分条件下培养。所示数据为一次实验的代表数据（n=3）。
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图3：使用含有或不含有MesenPure™的MesenCult™扩增培养基培养的小鼠骨髓或密质骨来源的MSC的多谱系分化潜能。添加MesenPure™在培养早期可观测到更富集的MSCs，与对照组相比可见更多和更密集的分化结果。（A）在MesenCult™扩增培养基中培养的小鼠BM MSCs（Control）可以分化为（B）脂肪细胞和（C）成骨细胞。（D）在添加有MesenPure™的MesenCult™扩增培养基中培养的小鼠BM MSCs可分化为（E）脂肪细胞和（F）成骨细胞。我们正在检测小鼠BM MSCs向软骨细胞的分化情况。（G）在MesenCult™扩增培养基中培养的小鼠CB BM MSCs（Control）可以分化为（H）脂肪细胞，（I）成骨细胞和（J）软骨细胞。脂肪来源的间充质干细胞和间充质祖细胞，以及小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs）也可使用MesenCult™扩增试剂盒进行培养，这些细胞也具有向脂肪和成骨细胞分化的潜能（结果未显示）。脂肪细胞使用Oil Red O染色。成骨细胞使用碱性磷酸酶和硝酸银（von Kossa）染色。软骨细胞使用Alcian Blue和Fast Red染色。图片结果来源于Passage 2。
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% d  [# [  f4 v4 D6 D7 b图4：使用MesenCult™培养扩增小鼠骨髓来源的MSCs的流式检测结果。小鼠骨髓来源的MSCs在MesenCult™扩增培养基（Control）或添加有MesenPure™的培养基中培养。Passage 2的MSCs使用间充质细胞表面标记物，CD106和Sca1和造血细胞标记物，CD45染色。染色后的细胞通过流式进行检测。流式结果显示，对照组培养的MSCs具有明显的CD45+造血细胞群和CD45-（CD106+ and Sca1+）的MSCs细胞群。加入MesenPure™后，与对照组相比，CD45-（CD106+ and Sca1+）的MSCs细胞群得到了富集。
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" s# E! _* b3 u如对MSC研究方面的培养基和试剂有任何问题，请发消息给STEMCELL公众账号，或与我们通过电话/邮件联系：400 885 9050 / INFO.CN@STEMCELL.COM/ G! F! |, O/ r8 `) `8 {$ @6 h
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