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标题: 慢病毒包装 [打印本页]

作者: tingwuyu 时间: 2017-7-26 13:37 标题: 慢病毒包装

最近在进行慢病毒包装实验，但是发现一个问题，同样的条件下，前后相隔几天包装出来的慢病毒滴度差异非常的大，后面怀疑是细胞代次的问题，但是细胞从液氮中复苏出来后，在第1-2代的时候病毒量能达到1E8，在第5-6代的时候就只有1E6了，这种差异也太大了吧。我用的是PLP1/PLP2/PLP-VSV-G/pl-GFP的四质粒系统，转染试剂使用PEI，细胞是293T细胞，想问下大家是否是细胞的原因呢？

作者: wuhuaguo88l 时间: 2017-7-27 16:36

确实挺奇怪的，唯一的变量是细胞代数，仔细回忆一下有没有其他的变量影响实验。

作者: wuhuaguo88l 时间: 2017-7-27 17:15

本帖最后由 wuhuaguo88l 于 2017-7-27 17:18 编辑

以前我们实验室貌似出现过293细胞随着代数增加，细胞状态变差的现象，后来发现是支原体污染，刚开始不明显，后来传几代细胞变差了，才意识到污染，可以考虑这方面因素；还有就是抽提的质粒浓度，内毒素等。

作者: xiaodoudou 时间: 2017-8-28 10:48

回复 tingwuyu 的帖子8 H) I8 D5 {1 k; t/ J$ l* O
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我也在做相关的实验，能否给个protocol.

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