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标题: 请问，western blot 时，若果内参基因和目标基因大小很接近，怎么办啊？ [打印本页]

作者: zandr 时间: 2009-6-17 11:54 标题: 请问，western blot 时，若果内参基因和目标基因大小很接近，怎么办啊？

请问，western blot 时，若果内参基因和目标基因大小很接近，怎么办啊。膜不能剪开？
十万火急

作者: shiaiqin 时间: 2009-6-17 12:07

能不能做一下等点聚焦啊?这样他们根据电荷的差异就可以分开了

作者: 饶冠华 时间: 2009-6-17 12:34

明显应该同时跑两块胶啊，相同条件下。一块染actin 一块染目的基因。实在不行你就一个一个染吧先染目的基因然后再把抗体洗掉染actin

作者: have-a-rest 时间: 2009-6-17 13:12

可以选择差异较大的内参，比如b-actin、GAPDH等。相差10kDa左右就可以区分开。0 {' m. c3 ~; j# p- D& D7 Q8 d
先染一个，洗了再染另一个也是个办法。

作者: sailboat 时间: 2009-6-17 22:26

保险些：一个一个的染吧

作者: carfan 时间: 2009-6-18 13:25

通常剪开染。太接近可以调整分离胶的浓度，分子克隆上有表格；我们还常用的就是像做磷酸化先染目的洗脱后再染对照。正常情况actin能够再脱膜3次后还染上的。跑两个胶不推荐，容易条带形状不同，发文章有的问题。

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