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标题: 细胞胰酶消化完了之后有大片絮状物是怎么回事？ [打印本页]

作者: LVXUEYAN1101 时间: 2016-10-18 16:09 标题: 细胞胰酶消化完了之后有大片絮状物是怎么回事？

养的贴壁细胞，0.25%的胰酶消化后有大片絮状物出现，怎么吹打都散不开，最后只能用100微米的滤膜滤掉，有哪位前辈能给解释一下是什么东西。

作者: gondobar 时间: 2016-10-18 16:14

很可能是死细胞，你台盼蓝染色试试。

作者: LVXUEYAN1101 时间: 2016-10-18 16:19

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如果是死细胞，是什么造成这种情况？

作者: 细胞之家 时间: 2016-10-18 16:54

1.细胞汇合率过高，细胞重叠，老化，消化后，细胞成块掉下，形成絮状物。; k3 @- Q" [/ t- }' X) Z I
2，如果是成纤维细胞，有可能是细胞分泌的胶原蛋白能力旺盛，絮状物是，胶原蛋白连接的许多细胞。. J4 \, }* }- @/ g
3，消化过度，大量细胞死亡，释放出的DNA缠绕细胞，形成絮状物。

作者: sfnana 时间: 2016-10-18 17:31

个人认为之所以会出现这种状况可能是由以下几种原因造成的：# J7 M5 i ^4 w! @/ T- P+ K
1.过度消化后死细胞释放出来的胶质状的DNA缠绕了细胞碎片形成的，这种很难吹散开。9 j1 H7 D6 Y+ [6 Y
2.有可能是细胞间质粘在一起使细胞成团，这样会造成细胞状态下降，细胞就不容易贴壁。
3.离心时的速度适当降低一点，防止细胞离心时结团过于紧密，不容易吹散。

作者: 免疫与细胞 时间: 2016-10-19 13:43

本帖最后由免疫与细胞于 2016-10-19 13:53 编辑

如果你感觉消化效果不好，可以调整胰酶种类和浓度，胰酶类型有很多，需要谨慎点选择，对比看看。此外，消化时间可以适当延长，消化时要轻轻摇晃。

作者: 风倾颜 时间: 2016-10-19 15:19

1.可能是细胞间质粘连在一起，细胞成团造成的
2.可能是细胞老化，状态不好，消化后，细胞成团掉下形成的絮状物。, k" R8 ]' ]" z
3，消化过度，细胞死亡后释放出DNA缠绕住细胞碎片形成絮状物。% A3 {. a, E+ V: z- {8 j
建议：消化时间不宜过长，消化过度易造成细胞状态不好，细胞传代次数过多，容易老化，可以冻存之后在复苏试试，此外细胞离心时转速不宜过高，因为离心转速过快，细胞不易吹散，易造成损伤。

作者: jiangmeng 时间: 2016-10-19 22:13

消化时间不要太长，或者换用更低浓度的胰酶消化细胞。

作者: jxsese 时间: 2016-10-20 17:52

我之前遇到过这种情况，建议消化的时候可以这样操作：加进胰酶之后摇晃一下，使胰酶在细胞上面过一遍，这时你很可能看到有些细胞成片脱落，也就是你看到的絮状物，这个时候可以快速的将这些块状物倾倒到瓶口，随胰酶一起倒掉，可以再向瓶里加入新的胰酶也可以不加，让剩下的胰酶继续消化细胞，这样坚持传代几次看看会不会好转？我分析主要原因是细胞生长状况不均匀，或者细胞活率相差比较大，有些细胞比较活跃有些则比较萎靡，生长不好或者说铁壁疏松的细胞会很快就消化下来，而状态好的细胞则消化时间会比较长。

作者: 天龙八部 时间: 2016-10-26 15:41

是不是消化时间太长造成细胞死亡了？消化前看看细胞状态怎么样？

作者: woshibotao_01 时间: 2016-10-26 16:18

这种情况多见细胞融合度太高了，消化后细胞成片或团状，这样的细胞很多都老化了

作者: 20084720113 时间: 2016-10-26 20:28

估计是你细胞培养的时间太久了，细胞长太多了，都叠起来了；你可以试试降低细胞接种密度，多观察，细胞融合率80%-90%就准备传代最好。

作者: luyue6453 时间: 2016-11-6 14:54

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用胰酶和一种叫trypLE的混合使用消化看看，如果是因为细胞长的太密脱落的，你再消化前就用pbs冲洗掉再消化，防止死细胞团再去缠绕活细胞。

作者: niliu730323143 时间: 2016-11-7 20:12

有可能你的细胞营养不够，导致部分细胞衰老，变得脆弱，胰酶消化不均匀，衰老脆弱的消化快，其余部分又没有消化。建议控制传代密度，尤其是周五传代时，比例应该是平时的两倍，培养基适当加多1-2ml。

作者: ccfc 时间: 2016-11-10 09:30

有可能是死细胞团，细胞融合度过高导致细胞衰老使细胞消化后成团难以打散

作者: lgfffancy 时间: 2016-11-10 10:15

怎么最近这么多新手？那是细胞团，用移液器吹打就行，你没吹打开是因为你吹打的方法欠佳，
或者细胞的性质，本身就很难吹打开，粘附增强。反复吹打吧。

作者: 城墨 时间: 2016-11-17 13:12

为什么不能是消化不完全导致的？你消化时间不够导致细胞成团，继续增加消化时间，摸索出一个合适的时间点啊。前几楼有板有眼的，不明所以。

作者: 吃呆猫 时间: 2016-11-18 14:40

你细胞太多了，细胞贴在一起，然后消化后就是这个样子

作者: 晗晗 时间: 2016-12-9 14:33

个人认为有以下几点原因：
1.细胞太密了，细胞重叠了% y4 V$ w6 z+ h v
2.细胞老化，状态不好
3.细胞消化过度，有的细胞死了，释放的DNA缠绕在一起了

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