干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 分离人胎盘间充质干细胞时，选的是那块部位或结构呀，也请教有没有详细的操作方法！ [打印本页]

作者: mozhibu 时间: 2016-9-24 09:01 标题: 分离人胎盘间充质干细胞时，选的是那块部位或结构呀，也请教有没有详细的操作方法！

刚开始试着用组织块贴壁法分离胎盘间充质干细胞，可是看着胎盘结构好复杂，也查不到间充质干细胞主要在胎盘的哪个部位和如何分离？请有经验的帮忙指点指点！

作者: xieyun20052005 时间: 2016-9-24 10:33

羊膜和绒毛膜

作者: xieyun20052005 时间: 2016-9-24 10:35

剥离后，常规胰酶消化

作者: mozhibu 时间: 2016-9-24 11:40

回复 xieyun20052005 的帖子
: N* `) l" w+ h( Q. I4 s
谢谢！

作者: qinchuanniu 时间: 2016-9-25 09:27

回复 mozhibu 的帖子

胶原酶Ⅱ消化，结合羟乙基淀粉沉淀法能较好地从人胎盘组织中分离出间充质干细胞；. `3 P9 I$ o' ?+ A1 e. _
产胎盘 , 剥除羊膜 , 取胎儿面胎盘组织 , PBS反复冲洗 , 用眼科剪剪成碎片 , 加入质量分数 0.1%胶原酶 Ⅱ , 于 37 ℃消化 45min, 过 100目筛网 , 收集细胞悬液，室温下以 1 000
r/min离心 5 min, 弃上清。用 PBS重悬细胞 , 加入质量分数 6%的羟乙基淀粉 (体积比为 4∶1)充分混匀 , 室温静置 45 min, 小心吸取上清 , 1 000 r/min离心 5 min, 弃上清 , PBS洗涤 2 次。按 1 ×106 /mL的接种。

作者: qinchuanniu 时间: 2016-9-25 09:27

回复 mozhibu 的帖子

胶原酶Ⅱ消化，结合羟乙基淀粉沉淀法能较好地从人胎盘组织中分离出间充质干细胞；
产胎盘 , 剥除羊膜 , 取胎儿面胎盘组织 , PBS反复冲洗 , 用眼科剪剪成碎片 , 加入质量分数 0.1%胶原酶 Ⅱ , 于 37 ℃消化 45min, 过 100目筛网 , 收集细胞悬液，室温下以 1 000
r/min离心 5 min, 弃上清。用 PBS重悬细胞 , 加入质量分数 6%的羟乙基淀粉 (体积比为 4∶1)充分混匀 , 室温静置 45 min, 小心吸取上清 , 1 000 r/min离心 5 min, 弃上清 , PBS洗涤 2 次。按 1 ×106 /mL的接种。

作者: FreeCell 时间: 2016-9-25 18:09

嘻嘻，别纠结了，从胎盘任何部位得到的MSC都是一样的

作者: fuyinsheng 时间: 2016-9-28 08:36

最好还是用胶原酶和胰酶消化，贴壁法效果不太好。胎盘胎儿面绒毛层和下面胎盘小叶其实都有MSCs都可以消化获得。羊膜上也有MSCs，但分离后容易混有羊膜上皮细胞，MSCs增殖能力强养养就纯了

作者: mozhibu 时间: 2016-9-29 11:27

本帖最后由 mozhibu 于 2016-9-29 11:28 编辑
; o& C5 l7 Y l0 W2 @0 _" E- H! b) d
回复 fuyinsheng 的帖子

消化的话，怎么判断消化的恰到好处呀！如果只用胰酶消化是否可以？

作者: 识得春风 时间: 2016-10-9 14:42

mozhibu 发表于 2016-9-29 11:27
/ S( i- ^9 b( j+ |* T回复 fuyinsheng 的帖子. f1 O& q2 u8 S/ h3 g8 v
N1 ?/ }5 e6 V0 E
消化的话，怎么判断消化的恰到好处呀！如果只用胰酶消化是否可以？

$ v! I& Q+ K) @+ X* F; t$ E
我也想问下这样的问题

作者: 细胞海洋 时间: 2016-10-10 21:39

回复识得春风的帖子: v: h4 n Y& t# J

建议你发新帖提问

作者: fuyinsheng 时间: 2016-10-14 14:24

回复 mozhibu 的帖子% |& K5 ~% x" m3 h& G* u& n' V5 h

只用胰酶的话短时间内效果不理想，时间长的话细胞活性影响特别大，还是胶原酶和胰酶一起用效果最好

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://stemcell8.cn/)