新手培养胎盘干细胞，全死了，求高人解答

鹏程万里

星期二观察7月23号培养的胎盘组织有细胞迁出，长的挺密的，便进行了传代，结果太难消化，便用了好几次胰酶进行消化，第一次0.5ml，第二次1ml，消化时间挺长，结果培养后今天发现细胞没有贴壁的，全死了，是不是因为胰酶用的太多，消化时间长的缘故啊?还有，消化时间长的细胞是跟另一瓶挺好消化的细胞一起用一个培养瓶进行培养的，它只用了0.5ml胰酶很快就消化下来了，也全死了。

defu

有图片吗 看图比较容易分析

wf78365421

消化过度

yeungfan

消化时间可能没控制好，一般3-5分钟就可以，如果5分钟后还没消化下来，就要在显微镜下一边消化一边观察

鹏程万里

回复 defu 的帖子  ~+ z- S+ c" O( v
- P( y* r8 z. s# s
没拍照，细胞都是圆形漂浮状态，为什么有的迁出细胞挺好消化，有的特别难消化，是细胞种类差别吗？谢谢

鹏程万里

回复 wf78365421 的帖子2 a3 `7 [" M/ W$ s

0 f, _4 R- g/ _7 W我也觉得消化过度，只是终止消化后，和另一个很好消化的细胞一起离心后培养，那个细胞也死了。难道是我终止消化不够？

鹏程万里

回复 yeungfan 的帖子! h/ I. v4 O) @4 e( @' q. N: x
0 o. F& z* n8 v
嗯，就是这么做的，最后都死了，为什么有的细胞那么难消化？迁出细胞那么强？

aiver2001

可能是消化过度，不过看你要分选的是哪种干细胞。我分选心肌干细胞，就是消化的时间常一点，因为心肌干细胞比心肌细胞要耐消化，基本上其他细胞死了，心肌干细胞还活的好好的。另外可以把组织剪的碎一点，因为干细胞一般都是直径比较小的，不怕损伤，消化的时候也更容易分离出来。

鹏程万里

回复 aiver2001 的帖子
' Q/ f* E- A! v/ n% E0 V" {/ A0 t
我培养的是胎盘干细胞，应该不那么耐消化。

hameln

我们一般消化细胞都是4分钟5分钟的样子啊 然后就加入等量以上的培养基终止消化，然后离心再培养