请教大家一个Westren Blot的问题

ind6562

    各位高人，我要检测的蛋白在细胞核与细胞质均有表达，之前用免疫荧光法检测过了，但我导师说还要定量检测才行，所以我现在想用Westren Blot检测它在细胞核与整个细胞的表达情况。请问有人做过类似的实验吗，如何用Westren Blot专门检测核内的蛋白，内参选b-actin可以吗？

liumenghan

你导师不是要你定量检测蛋白吗？用western不好定量吧…用ELISA比较好吧0 o/ G3 [8 d2 b3 g( S% n  \
如果一定要WB的话，只能用标准品蛋白设置个梯度，最后只能杂出个大体浓度范围。

ind6562

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. k/ C0 ^" S; p' X" d# U: B  `1 T6 n1 w  e8 e
相对定量就可以了，ELISA不是检测胞外蛋白的吗？

liumenghan

回复 ind6562 的帖子4 e; [0 K3 H4 j% W4 o8 o
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我以前看过一篇做核内binding protein的用的是ELISA。如果只是相对定量的话用不着了
* u! l9 ^: E8 ~我前段时间检测过胞浆蛋白，用试剂盒，实现胞浆蛋白和细胞核分离，你可以找份说明书看看。
; Y* e$ l2 w3 J, \2 M我也是新手……希望能对你有点儿帮助。

BenHantun

这样的话是不是分别提取核 和胞质，再从核和胞质中分离蛋白，如果做细胞的话，细胞最好多一些。内参能不能用组蛋白当内参呀，这个我不确定，你在问问别人

ind6562

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4 z& x( ?, l' C+ d- B1 [* Y- T1 ?. R* J2 ]& o9 ~: Z: O/ _
我刚看了文献，有人用HISTOE H2A作内参，谢谢啦~

wangzhiqi86

western最多也只能算半定量吧

Donnies

核内蛋白，我们一般选tublin的

jl860822

做免疫组化吧，可以很清楚的看出来

naturehu

细胞核的话能够用细胞核蛋白的提取试剂盒。